本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

10ng/ml -360ng/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中鸡免疫球A(IgA)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡免疫球A(IgA)。用纯化的【de】抗原包被微孔【kǒng】板【bǎn】，制成固相【xiàng】抗原，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球【qiú】A(IgA)，再与HRP标记的抗原，形成抗原-抗体-酶标抗原【yuán】复合物，经【jīng】过洗涤【dí】后加【jiā】底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转【zhuǎn】化成蓝色，并在【zài】酸的作【zuò】用下转化成终的。颜【yán】色的深浅和样【yàng】品中【zhōng】的A(IgA)呈【chéng】正【zhèng】相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通【tōng】过标【biāo】准曲免疫【yì】球线计【jì】算样品【pǐn】中鸡免疫球【qiú】A(IgA)浓度【dù】。

鸡免疫球A(IgA)酶联免疫分析试剂盒组成

标本要

1．标本采集后尽【jìn】早进【jìn】行提【tí】取，提取按相【xiàng】关文献进【jìn】行，提取后应尽快进【jìn】行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过（HRP）活性。

操作步骤

1.  标准【zhǔn】品的稀释：本试剂盒提供原倍标【biāo】准品【pǐn】一【yī】支，用户可按照下列图表【biǎo】在小试【shì】管【guǎn】中进行稀【xī】释。

2.  加样【yàng】：分别设【shè】空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂【jì】，其余各步操作相同）、标【biāo】准【zhǔn】孔、待测样【yàng】品【pǐn】孔。在酶标包【bāo】被【bèi】板上标准品【pǐn】准【zhǔn】确加样 50µl，待测样【yàng】品孔中先加【jiā】样品稀释液 40µl，然后再加待【dài】测样品 10µl（样品终稀释度为 5倍）。加样将【jiāng】样【yàng】品加于【yú】酶标板孔底【dǐ】部，尽量不触及孔壁，轻轻【qīng】晃【huǎng】动混匀【yún】。

3.温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟。

4.配液：将 30倍浓30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入【rù】显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻【qīng】轻震荡【dàng】混匀，37℃避【bì】光显色10分钟。

10.终【zhōng】止：每孔加终【zhōng】止液50µl，终止反应（此时蓝色立【lì】转）。

11.测定：以空白【bái】空调【diào】零，450nm波长依序【xù】测量各【gè】孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终【zhōng】止液后 15分钟以内进行。

操作程序总：

鸡免疫球A(IgA)酶联免疫分析试剂盒计算

以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根【gēn】据样【yàng】品的OD值【zhí】由标准曲线【xiàn】查出相应的浓度；再乘【chéng】以稀【xī】释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的【de】直【zhí】线回归方程式，将样品【pǐn】的 OD值代【dài】入【rù】方程式【shì】，计算出样品浓【nóng】度【dù】，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒【hé】从【cóng】冷藏环境中取出应在【zài】室温平衡【héng】 9-22分【fèn】钟后方可使用，酶标包被板开封后如未【wèi】用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。

3．各【gè】步加样【yàng】均【jun1】应使用加样器，并经常校对【duì】其准确性，以避免试验【yàn】误差。一【yī】次加样时间【jiān】好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每【měi】次测【cè】定的同时做标【biāo】准曲线【xiàn】，好做复孔。如标本中待测物质含【hán】量过高（样【yàng】本OD值大【dà】于【yú】标【biāo】准品孔【kǒng】孔的OD值），请先用样【yàng】品稀释液稀释一定倍数（n倍【bèi】）后再测定，计【jì】算时请后乘【chéng】以总稀释【shì】倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验。

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月