本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

0.7IU/L -32IU/L

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测定【dìng】人【rén】血【xuè】清、血【xuè】浆及相关液体【tǐ】样本中吲【yǐn】哚胺2,3-双加氧酶（IDO）含量。

实验原理

本试剂【jì】盒应用【yòng】双抗【kàng】体【tǐ】夹心法测定标本【běn】中人吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）水平【píng】。用纯化的人吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）抗体【tǐ】包被【bèi】微【wēi】孔板【bǎn】，制成固相抗【kàng】体，往【wǎng】包被单抗【kàng】的微【wēi】孔中依【yī】次加入吲哚胺2,3-双加【jiā】氧酶（IDO），再与HRP标记的吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）抗体结合，形成【chéng】抗体-抗【kàng】原【yuán】-酶【méi】标【biāo】抗【kàng】体复合物，经过洗涤后加【jiā】底物TMB显色。TMB在HRP酶【méi】的【de】催化下转化【huà】成【chéng】蓝色，并在酸【suān】的【de】作用下转化成终的。颜色的深浅和样品【pǐn】中的吲哚胺2,3-双【shuāng】加氧酶（IDO）呈正【zhèng】相关。用【yòng】酶标仪在450nm波长【zhǎng】下测定吸光度【dù】（OD值），通【tōng】过标准曲线计算【suàn】样品中人吲哚胺2,3-双加氧【yǎng】酶（IDO）浓度。 

人吲【yǐn】哚胺2,3-双加氧酶（IDO）酶联免疫【yì】分析【xī】试剂盒组成【chéng】 

标本要求 

1．标本【běn】采【cǎi】集后尽【jìn】早进行【háng】提【tí】取，提取按【àn】相【xiàng】关文献进行，提取后【hòu】应尽快进行实验。若不能【néng】马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测【cè】含NaN3的样【yàng】品，因NaN3抑【yì】制辣根过氧化物酶【méi】的（HRP）活【huó】性【xìng】。

操作步骤

1.标准【zhǔn】品的稀释【shì】：本试剂盒提供原倍标准品一支【zhī】，用【yòng】户【hù】可按照下【xià】列图表【biǎo】在小试管中【zhōng】进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空【kōng】白对照【zhào】孔不加【jiā】样品及酶标试【shì】剂【jì】，其余【yú】各步操作相同）、标【biāo】准孔、待测样品孔。在【zài】酶标包被板上【shàng】标准品准确加样50μl，待测样品孔中【zhōng】先加样品稀释【shì】液40μl，然后再加【jiā】待【dài】测样品10μl（样品终【zhōng】稀【xī】释度为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶标板【bǎn】孔底部，尽量不触及孔【kǒng】壁，轻【qīng】轻晃【huǎng】动混【hún】匀。

3.温育：用封板膜封板后置【zhì】37℃温育30分【fèn】钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗【xǐ】涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃去【qù】液【yè】体，甩干，每孔【kǒng】加满洗涤液，静置30秒【miǎo】后弃去，如此重【chóng】复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色【sè】：每孔先加入显【xiǎn】色【sè】剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避【bì】光显色【sè】15分钟【zhōng】.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空【kōng】白空调【diào】零，450nm波长【zhǎng】依序【xù】测量各【gè】孔的吸光度（OD值）。 测定应在【zài】加终止液后15分【fèn】钟以内【nèi】进行。

操作程序总结：

人吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）酶联免疫分析试剂盒计算

以【yǐ】标准【zhǔn】物的浓度为横【héng】坐【zuò】标，OD值【zhí】为纵坐标【biāo】，在坐标【biāo】纸上绘出【chū】标准曲线，根据样品【pǐn】的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀【xī】释【shì】倍数；或【huò】用标准物的浓度与OD值【zhí】计【jì】算出标准曲线的直【zhí】线回归方程【chéng】式，将【jiāng】样品的【de】OD值代入方程式，计算【suàn】出【chū】样品浓【nóng】度，再【zài】乘以稀释倍数，即【jí】为样品的实际浓度。 

注意事项

1．试【shì】剂盒【hé】从冷藏环【huán】境中取【qǔ】出【chū】应在室温平衡9-22分钟后【hòu】方【fāng】可使用，酶标包被板开封后如未【wèi】用完，板条应装入密封袋【dài】中保存。

2．浓洗涤液可能【néng】会有结晶【jīng】析出【chū】，稀释时可在水浴中加温【wēn】助溶，洗涤【dí】时不影响【xiǎng】结果。

3．各步【bù】加样均应使用加样器，并经【jīng】常校【xiào】对其准确【què】性【xìng】，以避免试【shì】验误【wù】差。一次加样时间好【hǎo】控制在5分钟内，如标本【běn】数【shù】量多【duō】，推荐使用排枪加【jiā】样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标【biāo】本【běn】中【zhōng】待测物质含量过高（样【yàng】本【běn】OD值大于标【biāo】准品孔孔【kǒng】的【de】OD值），请【qǐng】先用【yòng】样品稀【xī】释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请【qǐng】后乘以总稀释【shì】倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说【shuō】明书【shū】的操作进行，试验结果判定必须以酶标【biāo】仪【yí】读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月