本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

3pg/ml - 80pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测【cè】定大鼠血清、血浆及相关液【yè】体【tǐ】样本中【zhōng】脱氢【qīng】表雄酮硫酸【suān】酯(DHEA-S)含量【liàng】。

实验原理

本【běn】试剂盒【hé】应用双【shuāng】抗体夹心法测定【dìng】标本中大鼠脱氢表雄酮硫【liú】酸酯 (DHEA-S)水平。用【yòng】纯化【huà】的大鼠脱氢表雄酮硫【liú】酸酯(DHEA-S)抗体【tǐ】包被微孔板，制成固相【xiàng】抗体，往包被单抗【kàng】的微孔【kǒng】中依次加入脱氢【qīng】表雄酮硫酸酯(DHEA-S)，再【zài】与  HRP 标记的【de】脱【tuō】氢表雄酮硫【liú】酸酯【zhǐ】(DHEA-S)抗体【tǐ】结合，形成抗体-抗原-酶标抗体【tǐ】复合物，经过洗【xǐ】涤后【hòu】加底物  TMB 显【xiǎn】色。TMB 在  HRP酶【méi】的【de】催化下【xià】转化成蓝色，并【bìng】在酸【suān】的作用【yòng】下转【zhuǎn】化成【chéng】终【zhōng】的。颜【yán】色的深浅和样品中的脱【tuō】氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)呈正【zhèng】相关【guān】。用酶标仪【yí】在 450nm波长下测定【dìng】吸光度（OD值），通过【guò】标准曲线计算样品中大鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)浓度。

大鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)酶联免疫分析试剂盒组成

标本要求

1．标【biāo】本采集后尽早进行提取，提取【qǔ】按相关文献进【jìn】行，提【tí】取后应尽快进【jìn】行【háng】实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因   NaN3抑【yì】制【zhì】辣根过氧化物酶的（HRP）活【huó】性。

操作步骤

1.  标准【zhǔn】品的稀释：本【běn】试剂盒提供原倍标准【zhǔn】品一支，用【yòng】户可按【àn】照下列图表在小试管中进行【háng】稀释。

2.  加样：分别设空白孔（空白对【duì】照孔不加样品及酶标【biāo】试剂，其余【yú】各【gè】步操【cāo】作相同【tóng】）、标准孔、待测样品孔。在酶标【biāo】包被板上标【biāo】准【zhǔn】品准确加样 50µl，待测样品孔【kǒng】中【zhōng】先【xiān】加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5倍）。加样将样【yàng】品加【jiā】于酶标板孔【kǒng】底【dǐ】部，尽量不触及孔【kǒng】壁，轻轻晃动【dòng】混【hún】匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液【yè】：将 30倍【bèi】浓缩【suō】洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃【qì】去液【yè】体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒【miǎo】后【hòu】弃去，如此重复 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显【xiǎn】色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻【qīng】轻震【zhèn】荡混匀【yún】，37℃避光显【xiǎn】色【sè】15分钟.

10.终止：每孔加【jiā】终止【zhǐ】液50µl，终止反应【yīng】（此时蓝色【sè】立转）。

11.测【cè】定：以空白【bái】空【kōng】调零，450nm波长依序测量【liàng】各【gè】孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

操作程序总结：

大鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)酶联免疫分析试剂盒计算

以标准物的浓度为横【héng】坐标【biāo】， OD值为【wéi】纵坐标，在坐标纸上绘出标【biāo】准曲线，根【gēn】据样品的【de】OD值由标【biāo】准曲线查出相应的浓【nóng】度【dù】；再乘以稀【xī】释倍数；或用标准物的【de】浓度与  OD值计【jì】算【suàn】出标准曲线的【de】直线回【huí】归方程【chéng】式，将【jiāng】样品的 OD值【zhí】代入方【fāng】程式，计【jì】算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度【dù】。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环【huán】境【jìng】中取出应在室【shì】温平衡 9-22分【fèn】钟后方可使用，酶标包被板开封【fēng】后如【rú】未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗【xǐ】涤液可能【néng】会【huì】有结晶【jīng】析出，稀释时可在【zài】水浴中加温助溶，洗【xǐ】涤时不影响结【jié】果。

3．各【gè】步加样均应【yīng】使用加【jiā】样器，并【bìng】经常【cháng】校对其准确性，以避免试验【yàn】误差。一【yī】次加样时间好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次【cì】测定【dìng】的同【tóng】时做【zuò】标准曲线，好【hǎo】做【zuò】复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值大于标准品【pǐn】孔【kǒng】孔的 OD值【zhí】），请先【xiān】用样品稀释液【yè】稀释一定倍数（n倍）后再测定【dìng】，计算时请后乘以【yǐ】总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定【dìng】必【bì】须【xū】以酶标仪读数为【wéi】准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月