本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

3pg/ml - 80pg/ml

使用目的：

本试剂盒用【yòng】于测定小鼠血清、血浆及相【xiàng】关液体样【yàng】本中硫【liú】化氢（H2S）含量。

实验原理

本试剂盒应用【yòng】双抗体【tǐ】夹心法测定标【biāo】本中【zhōng】小【xiǎo】鼠硫【liú】化【huà】氢（H2S）水平【píng】。用纯化【huà】的小鼠【shǔ】硫化氢（H2S）抗体【tǐ】包被微孔【kǒng】板，制成固【gù】相抗【kàng】体【tǐ】，往包被【bèi】单【dān】抗的【de】微孔中依【yī】次加入硫化【huà】氢（H2S），再与HRP标记的硫化氢（H2S）抗体结合，形成抗体-抗原-酶【méi】标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶【méi】的催化下转化成蓝【lán】色，并在酸【suān】的作用下转化成终的。颜色的深浅【qiǎn】和【hé】样品中的硫化【huà】氢（H2S）呈正相关。用酶标仪【yí】在【zài】450nm波长下测定吸光度【dù】（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠【shǔ】硫化【huà】氢（H2S）浓【nóng】度。 

小鼠硫化氢（H2S）ELISA试剂盒组成 

标本要求 

1．标本采集后尽【jìn】早进行【háng】提【tí】取，提取【qǔ】按相关文献进行，提取后应尽快进行【háng】实验。若不能【néng】马上进行试验，可将标本【běn】放于【yú】-20℃保存，但应【yīng】避免【miǎn】反【fǎn】复冻【dòng】融。

2．不能【néng】检测含NaN3的【de】样【yàng】品，因NaN3抑制辣根过氧化【huà】物【wù】酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试【shì】剂盒提【tí】供原倍标准品一支，用【yòng】户【hù】可按照下列【liè】图表【biǎo】在小试管中进行稀【xī】释。

2.加样：分【fèn】别设空白孔（空白对【duì】照孔不加样【yàng】品【pǐn】及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在【zài】酶标【biāo】包被板上标准品准【zhǔn】确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样【yàng】品10μl（样【yàng】品终【zhōng】稀释度【dù】为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶标板孔底部，尽【jìn】量【liàng】不触【chù】及孔壁【bì】，轻轻晃【huǎng】动【dòng】混匀。

3.温育【yù】：用封板膜封板后置37℃温【wēn】育30分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤【dí】：小【xiǎo】心揭掉封板膜【mó】，弃【qì】去液【yè】体，甩干，每孔加满洗涤液【yè】，静置30秒后弃【qì】去，如此重复5次【cì】，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔【kǒng】先加入显色剂A50μl，再加【jiā】入显色剂【jì】B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避【bì】光【guāng】显【xiǎn】色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以【yǐ】空【kōng】白空调零，450nm波【bō】长依序测量【liàng】各【gè】孔的吸光【guāng】度（OD值）。 测定应【yīng】在加终止液【yè】后15分钟以内进【jìn】行。

操作程序总结：

小鼠硫化氢（H2S）ELISA试剂盒计算

以【yǐ】标准物的浓度为【wéi】横坐标，OD值为纵【zòng】坐标【biāo】，在坐标【biāo】纸上绘出标准【zhǔn】曲线，根据样【yàng】品的OD值由标准曲线【xiàn】查出相应的浓度；再乘以【yǐ】稀【xī】释【shì】倍数；或用标准物【wù】的浓度与OD值计【jì】算【suàn】出标准曲线的直线回归方【fāng】程式，将样品的OD值代入方程式，计【jì】算出样品浓度，再【zài】乘以稀释倍数，即为【wéi】样品的实际浓度。 

注意事项

1．试剂盒从冷藏【cáng】环境【jìng】中取出应在室温【wēn】平衡9-22分钟后【hòu】方可使【shǐ】用，酶标【biāo】包被板开封后如未用完，板条应装入密【mì】封袋中【zhōng】保存。

2．浓【nóng】洗涤液可【kě】能【néng】会有结晶析【xī】出，稀释时可在水浴中加温【wēn】助溶，洗涤时不影【yǐng】响【xiǎng】结果。

3．各步加【jiā】样【yàng】均应使用加【jiā】样器，并经常校对其【qí】准【zhǔn】确性，以避【bì】免试验误差。一次加【jiā】样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推【tuī】荐使用【yòng】排【pái】枪加样。

4．请每次【cì】测定的同时做标准曲线，好做复孔。如【rú】标本【běn】中待测【cè】物质含量【liàng】过高（样【yàng】本OD值大于【yú】标准【zhǔn】品孔孔【kǒng】的OD值【zhí】），请先用样品稀释液稀释一【yī】定倍【bèi】数【shù】（n倍）后再测定，计【jì】算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说明书的操作进【jìn】行，试验结【jié】果判定必须以酶【méi】标仪读数【shù】为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月