本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

10µmol/L -320µmol/L

使用目的：

本试【shì】剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本【běn】中极低密度脂蛋白(VLDL)含【hán】量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中【zhōng】鸡【jī】极低密度【dù】脂蛋白 (VLDL)水平。用纯化的【de】鸡极【jí】低密度脂【zhī】蛋白(VLDL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗【kàng】的微孔中依次加入极低密度脂【zhī】蛋白(VLDL)，再与【yǔ】  HRP 标【biāo】记的极低【dī】密【mì】度【dù】脂蛋白(VLDL)抗体结合，形成【chéng】抗体-抗原-酶标【biāo】抗体复合【hé】物，经过【guò】洗涤【dí】后加【jiā】底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催【cuī】化下转化【huà】成【chéng】蓝色，并在酸的作用下转化成【chéng】终的【de】。颜色的【de】深浅和【hé】样品中的极【jí】低【dī】密度脂蛋白 (VLDL)呈正【zhèng】相【xiàng】关。用酶标仪【yí】在 450nm波长下测定吸【xī】光度（OD值【zhí】），通过标准曲【qǔ】线计【jì】算样【yàng】品中鸡极低密度脂蛋白【bái】(VLDL)浓度。

鸡极低密度脂蛋白(VLDL)酶联免疫分析试剂盒组成

标本要求

1．标【biāo】本采集后尽早【zǎo】进行提取【qǔ】，提取按相关文献【xiàn】进行，提取后应【yīng】尽快进行实【shí】验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的【de】样品，因   NaN3抑【yì】制辣根【gēn】过氧【yǎng】化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.  标【biāo】准【zhǔn】品【pǐn】的【de】稀释：本【běn】试【shì】剂【jì】盒提供原倍标准品一支，用【yòng】户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.  加样：分【fèn】别【bié】设【shè】空白孔【kǒng】（空【kōng】白对照孔不加样品及酶【méi】标试剂，其余各步操作相同）、标【biāo】准孔、待测【cè】样品孔。在酶标包被板上【shàng】标准品【pǐn】准【zhǔn】确加样 50µl，待测样品孔中先【xiān】加【jiā】样品稀【xī】释液 40µl，然后再加待测样【yàng】品 10µl（样品终稀释度为 5倍）。加样【yàng】将样品加于酶标【biāo】板孔底【dǐ】部，尽量不【bú】触及孔【kǒng】壁，轻【qīng】轻晃动【dòng】混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用【yòng】蒸【zhēng】馏【liú】水  30倍稀释后备用。

5.洗涤【dí】：小心【xīn】揭【jiē】掉封板膜，弃去液体，甩干，每【měi】孔加满【mǎn】洗涤液，静置 30秒后弃去，如【rú】此重复 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色【sè】：每孔先【xiān】加入显色【sè】剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震【zhèn】荡混【hún】匀，37℃避光显【xiǎn】色15分钟.

10.终【zhōng】止：每【měi】孔加终止【zhǐ】液  50µl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以【yǐ】空白空调零，450nm波长依【yī】序【xù】测量各【gè】孔的吸光度（OD 值）。测定【dìng】应【yīng】在加终止液后 15分钟以内进行。

操作程序总结：

鸡极低密度脂蛋白(VLDL)酶联免疫分析试剂盒计算

以【yǐ】标准物的浓度为横坐标， OD值【zhí】为纵【zòng】坐标【biāo】，在坐标纸上绘【huì】出标准曲线，根据【jù】样品的【de】OD值由标准【zhǔn】曲线查出相应的浓度；再乘【chéng】以稀【xī】释倍数；或【huò】用标准物的浓度与  OD值计【jì】算出【chū】标准曲线的直线回归方程式【shì】，将样品的 OD值代入方程式，计算出样【yàng】品浓度【dù】，再乘以稀释倍数【shù】，即为样品的实【shí】际浓度。

注意事项

1．试剂盒从【cóng】冷藏环境中取出应在室【shì】温【wēn】平衡 9-22分钟【zhōng】后方可使用，酶标包被【bèi】板【bǎn】开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可【kě】能会【huì】有结【jié】晶析出，稀释时【shí】可在水浴中【zhōng】加【jiā】温助溶，洗涤时不【bú】影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常【cháng】校对【duì】其准【zhǔn】确性，以避免【miǎn】试【shì】验误差。一次加【jiā】样时间【jiān】好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请【qǐng】每次测定的同【tóng】时【shí】做标准曲线，好做【zuò】复孔。如标本中【zhōng】待【dài】测物质含量【liàng】过高（样本  OD值大于标准品孔孔的【de】 OD值【zhí】），请先用样品稀【xī】释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请【qǐng】后乘【chéng】以总【zǒng】稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的【de】操作进【jìn】行，试验结果判定【dìng】必须以酶【méi】标仪【yí】读【dú】数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月