本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

3.0μg/L -80μg/L

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测定【dìng】小鼠血清、血浆及【jí】相关液体样本中尿蛋白（UP）含量【liàng】。

实验原理

本试剂【jì】盒应【yīng】用双【shuāng】抗体夹心法【fǎ】测定标本中小鼠尿【niào】蛋【dàn】白（UP）水平。用纯化的小【xiǎo】鼠尿蛋白（UP）抗【kàng】体【tǐ】包被微孔板，制成固相抗体，往包【bāo】被【bèi】单抗的微孔中依【yī】次加入【rù】尿蛋白【bái】（UP），再与HRP标记的尿蛋白【bái】（UP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶【méi】标抗体复合物【wù】，经【jīng】过洗涤后【hòu】加【jiā】底物TMB显色。TMB在【zài】HRP酶的【de】催化下【xià】转化成蓝色，并在【zài】酸【suān】的作用下转化成【chéng】终的。颜色的深浅和【hé】样品【pǐn】中的尿蛋白（UP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值【zhí】），通过标准曲线计【jì】算【suàn】样品中小鼠尿蛋白（UP）浓度【dù】。 

小鼠尿蛋白（UP）ELISA试剂盒组成 

标本要求 

1．标本采集后尽早进【jìn】行提取，提取按相关【guān】文献进行，提取【qǔ】后应尽快进行实验。若不能马【mǎ】上进行试验，可【kě】将标本放于-20℃保【bǎo】存，但【dàn】应避免反复【fù】冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制【zhì】辣根【gēn】过氧化物酶【méi】的（HRP）活【huó】性【xìng】。

操作步骤

1.标准【zhǔn】品的稀【xī】释：本试【shì】剂盒提供原【yuán】倍标准品一支，用户可按照下【xià】列图表在小试管【guǎn】中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样【yàng】品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待【dài】测样【yàng】品孔【kǒng】。在酶【méi】标包被板上【shàng】标准品准确加【jiā】样50μl，待测样品孔中先加【jiā】样【yàng】品稀【xī】释液【yè】40μl，然【rán】后再加【jiā】待【dài】测【cè】样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔【kǒng】底部，尽【jìn】量不触及孔【kǒng】壁【bì】，轻轻【qīng】晃【huǎng】动混匀。

3.温【wēn】育：用【yòng】封【fēng】板【bǎn】膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉【diào】封板膜【mó】，弃去液体，甩【shuǎi】干，每孔加满洗涤【dí】液【yè】，静置30秒后【hòu】弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色【sè】：每孔先加入【rù】显色剂A50μl，再加入显【xiǎn】色【sè】剂B50μl，轻轻【qīng】震荡混匀，37℃避【bì】光【guāng】显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测【cè】定：以【yǐ】空【kōng】白空调零，450nm波长依序测【cè】量【liàng】各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止【zhǐ】液后15分钟以内【nèi】进行【háng】。

操作程序总结：

小鼠尿蛋白（UP）ELISA试剂盒计算

以【yǐ】标准物【wù】的浓度为横坐【zuò】标，OD值为纵【zòng】坐标，在坐标纸上【shàng】绘出标准曲【qǔ】线，根据样品【pǐn】的OD值由标准曲线【xiàn】查出【chū】相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓【nóng】度与【yǔ】OD值计【jì】算出标准【zhǔn】曲【qǔ】线的直线回归方【fāng】程式，将样【yàng】品的OD值代【dài】入【rù】方程式【shì】，计算出样品浓度，再乘以稀释【shì】倍数，即为样品的【de】实际浓度。 

注意事项

1．试剂【jì】盒【hé】从冷藏环【huán】境中取出应在室温平衡9-22分钟后方【fāng】可使用，酶标【biāo】包被板开封后如未用【yòng】完，板条应装【zhuāng】入密【mì】封袋中【zhōng】保存【cún】。

2．浓洗涤液可能会【huì】有结晶析【xī】出，稀释时【shí】可【kě】在水浴【yù】中加温助溶，洗涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各步加样均应【yīng】使用加样【yàng】器，并经常校对其准确性【xìng】，以【yǐ】避免试验【yàn】误差。一【yī】次【cì】加样时间好【hǎo】控制在【zài】5分钟内【nèi】，如标本数量多，推荐使用排枪【qiāng】加样。

4．请每【měi】次测定【dìng】的同时【shí】做标【biāo】准【zhǔn】曲线【xiàn】，好做复孔【kǒng】。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于【yú】标准品孔【kǒng】孔【kǒng】的OD值），请先用样品【pǐn】稀释液稀释一定倍数（n倍）后再【zài】测定，计算时【shí】请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按照说【shuō】明书的操作进行，试验结果判【pàn】定【dìng】必须以酶标仪【yí】读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月