大【dà】鼠 巨噬细胞【bāo】炎性蛋白【bái】-1β（MIP-1β）ELISA 检测试剂盒

本试剂仅供研究使用  标本：血清或血浆

试验原理

MIP-1β试剂【jì】盒【hé】是固相夹心法酶联免【miǎn】疫吸附实验（ELISA）.已【yǐ】知【zhī】MIP-1β浓【nóng】度的【de】标【biāo】准品、未知浓度的【de】样品加入微孔酶【méi】标【biāo】板内进行检测【cè】。洗涤【dí】后【hòu】，加入【rù】亲【qīn】和素标记过的HRP。再经过温【wēn】育和【hé】洗涤，去【qù】除未结合的酶结合物，然后加入底【dǐ】物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜【yán】色的【de】深浅【qiǎn】和样品中MIP-1β的浓度呈比例关【guān】系。

试剂盒内容及其配制

自备材料

1．蒸馏水。

2．加【jiā】样器【qì】：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．避免直【zhí】接接触终止液和【hé】底物A、B。一【yī】旦接【jiē】触到这些液体，请尽快用水冲洗【xǐ】。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

大鼠 巨噬【shì】细【xì】胞炎性蛋白-1β（MIP-1β）ELISA 检测试剂【jì】盒操作注意事【shì】项

1．试剂应按标签【qiān】说明书储存，使用前【qián】恢复到室温。稀稀【xī】过后的标准品应丢【diū】弃【qì】，不【bú】可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其【qí】它试剂应包装好或【huò】盖好。不同批号的试【shì】剂不【bú】要混【hún】用。保质前【qián】使【shǐ】用。

4．使用一次性的吸头【tóu】以免交叉【chā】污【wū】染，吸【xī】取终止【zhǐ】液【yè】和底物A、B液时【shí】，避免使用带金属部【bù】分【fèn】的加样器。

5．使用干净的【de】塑料容器配置【zhì】洗涤液。使【shǐ】用前充分【fèn】混匀试剂盒里【lǐ】的各种成份及样品。

6．洗涤【dí】酶【méi】标板时应充分拍干【gàn】，不要将吸【xī】水纸直接放入【rù】酶标反【fǎn】应孔中吸水。

7．底物A应【yīng】挥发，避免长时间打开盖子【zǐ】。底物B对光敏感【gǎn】，避免长时间暴露于光下【xià】。避免用手接触【chù】，有毒。实验【yàn】完成【chéng】后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1、血【xuè】清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用【yòng】不含热原【yuán】和内毒素的试管。收集血【xuè】液后，1000×g离心10分钟将血清【qīng】和红细【xì】胞迅速【sù】小心地分离。

2、血【xuè】浆-----EDTA、柠【níng】檬酸盐、肝素【sù】血浆可用于检测。1000×g离【lí】心30分钟去除【chú】颗粒。

3、细胞上清液---1000×g离【lí】心10分钟去除颗粒【lì】和【hé】聚合物【wù】。

4、保【bǎo】存------如果【guǒ】样【yàng】品不【bú】立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免【miǎn】反复冷冻。尽可能的不要使用溶【róng】血【xuè】或【huò】高血脂血。如果【guǒ】血清中大量颗【kē】粒，检测前先离【lí】心或过滤【lǜ】。不要【yào】在【zài】37℃或更【gèng】高的温度加热解冻。应在室温下解【jiě】冻并确保样品均匀地充分【fèn】解【jiě】冻。

试剂的准备

1．标准品：标准品【pǐn】的系列稀释应在实【shí】验时准【zhǔn】备，不【bú】能储存【cún】。稀释前【qián】将标准品振荡【dàng】混匀。稀释比例【lì】按下表中进行：

2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要【yào】使液体产【chǎn】生大量的泡沫，以免【miǎn】加样时加【jiā】入大量的【de】气【qì】泡，产生加样【yàng】上的【de】误差。

2．根据待测【cè】样【yàng】品数量加【jiā】上【shàng】标准品【pǐn】的【de】数量决定所需的【de】板条数。每个标准品和空白【bái】孔建议做复孔。每【měi】个样【yàng】品根据自己的数【shù】量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好【hǎo】后的标准品50ul于反应孔【kǒng】、加入待测【cè】样品50ul于反【fǎn】应孔内。盖上膜板【bǎn】，轻轻【qīng】振荡【dàng】混匀，37℃温育【yù】1小时【shí】。

4．甩【shuǎi】去孔【kǒng】内液体，每孔加满【mǎn】洗涤液，振荡30秒，甩【shuǎi】去洗涤液，用吸水纸拍干【gàn】。重复【fù】此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次【cì】。

5．每孔加入80ul的【de】亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀【yún】，37℃温育30分钟【zhōng】。

6．甩【shuǎi】去孔内液体【tǐ】，每孔加满洗涤液，振荡30秒【miǎo】，甩去洗涤液【yè】，用吸水【shuǐ】纸【zhǐ】拍干。重复【fù】此操作3次【cì】。如果【guǒ】用洗板机【jī】洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混【hún】匀【yún】，37℃温育10分钟。避免【miǎn】光照。

8．取出酶标板，迅速加【jiā】入【rù】50ul终止液，加入终止液后应立即测定【dìng】结【jié】果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案

局限

6号标准【zhǔn】品以上的结果为非【fēi】线【xiàn】性的，根据此标准曲线无【wú】法得到精确【què】的【de】结果。

大鼠 巨【jù】噬细胞炎【yán】性【xìng】蛋白-1β（MIP-1β）ELISA 检测试剂盒试剂盒【hé】性能

1. 灵敏度：小【xiǎo】的检【jiǎn】测浓度小于1号标准品【pǐn】。稀释度的【de】线性【xìng】。样品线性回归【guī】与预期浓度相关【guān】系数R值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结 果 判 断 与 分 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为【wéi】纵【zòng】坐标（Y），相应的MIP-1β标准品浓【nóng】度为【wéi】横【héng】坐标（X），做得相应【yīng】的曲【qǔ】线，样品的MIP-1β含量可【kě】根【gēn】据【jù】其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml