人3-磷酸甘油脱氢酶（GPDH）酶联免疫分析试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

20 IU/L -480 IU/L

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测【cè】定【dìng】人血清、血浆【jiāng】及相【xiàng】关液体样【yàng】本中3-磷酸甘油脱氢【qīng】酶（GPDH）含量。

实验原理：

本试【shì】剂【jì】盒应用双【shuāng】抗体夹心法测定标本中人3-磷酸甘油脱氢酶（GPDH）水平【píng】。用纯化的人3-磷酸甘【gān】油【yóu】脱氢酶【méi】（GPDH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单【dān】抗的【de】微孔中依次加入3-磷酸甘油脱【tuō】氢酶（GPDH），再【zài】与【yǔ】HRP标记的【de】3-磷酸【suān】甘【gān】油脱【tuō】氢酶（GPDH）抗体结【jié】合，形成抗体【tǐ】-抗【kàng】原【yuán】-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物【wù】TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成【chéng】蓝色，并【bìng】在【zài】酸的【de】作【zuò】用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的3-磷酸甘油脱【tuō】氢酶【méi】（GPDH）呈正相【xiàng】关。用酶【méi】标【biāo】仪在450nm波长【zhǎng】下【xià】测定吸光度（OD值），通过【guò】标准曲【qǔ】线计算样品中人3-磷酸甘油脱氢酶（GPDH）浓【nóng】度。 

试剂盒组成： 

标本要求： 

1．标本采集后尽早进行提取【qǔ】，提取按【àn】相关文【wén】献进行，提取后应尽快进行【háng】实验。若不能【néng】马上进行试验【yàn】，可【kě】将【jiāng】标本【běn】放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含【hán】NaN3的【de】样品【pǐn】，因NaN3抑制【zhì】辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人3-磷酸甘油脱氢酶（GPDH）酶联免疫分析试剂盒操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一【yī】支，用户可按照【zhào】下【xià】列图表在小试【shì】管【guǎn】中进行【háng】稀释。

2.加样：分别设空白孔（空【kōng】白对照孔不加样【yàng】品及【jí】酶标试剂，其余各步操作相【xiàng】同）、标准孔、待测样品孔【kǒng】。在酶标包被板上标准品准确【què】加样50μl，待【dài】测【cè】样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样【yàng】品10μl（样品zui终稀释度【dù】为5倍【bèi】）。加【jiā】样将样品加【jiā】于酶标板孔底部，尽【jìn】量不【bú】触及孔壁，轻轻晃动混匀【yún】。

3.温育：用【yòng】封板膜封【fēng】板【bǎn】后置37℃温育30分【fèn】钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小【xiǎo】心揭掉封板膜，弃去【qù】液体，甩【shuǎi】干【gàn】，每【měi】孔加满洗涤【dí】液，静置30秒后【hòu】弃去，如【rú】此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先【xiān】加入显色剂【jì】A50μl，再加【jiā】入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀【yún】，37℃避【bì】光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空白空调【diào】零【líng】，450nm波【bō】长依序【xù】测量各【gè】孔【kǒng】的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以【yǐ】内进【jìn】行。

人3-磷酸甘油【yóu】脱【tuō】氢酶（GPDH）酶联【lián】免疫分析【xī】试剂盒【hé】操作【zuò】程序总结：

计算：

以标准物的浓【nóng】度为横坐标，OD值为纵坐标【biāo】，在坐标【biāo】纸上绘【huì】出标【biāo】准曲线【xiàn】，根据样品的OD值由标准曲【qǔ】线查出【chū】相应【yīng】的【de】浓度【dù】；再乘以稀释倍数【shù】；或用标准物的浓度【dù】与OD值计算出标【biāo】准曲线的直线回归方程【chéng】式，将样品的OD值【zhí】代入方程【chéng】式【shì】，计算出样品浓【nóng】度，再乘以稀释倍数【shù】，即为样品的【de】实际浓度。 

注意事项：

1．试剂【jì】盒【hé】从【cóng】冷【lěng】藏环境中取出应在室温平【píng】衡9-22分钟【zhōng】后方可使用，酶标【biāo】包被板开封后如【rú】未用完，板条应装【zhuāng】入【rù】密封袋中保存。

2．浓洗涤【dí】液【yè】可能会有结晶析出【chū】，稀释【shì】时可在水浴中加【jiā】温【wēn】助溶，洗涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各步加样均应使用加样器【qì】，并经常校【xiào】对其准确性，以【yǐ】避免试验【yàn】误差。一次加【jiā】样【yàng】时【shí】间【jiān】控制【zhì】在5分钟内，如标【biāo】本数量多，推荐使用排【pái】枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线。如标本中【zhōng】待测物质含量【liàng】过高（样本OD值大【dà】于标准品孔di一孔【kǒng】的OD值【zhí】），请先用样品稀【xī】释液稀释一定倍数（n倍【bèi】）后【hòu】再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数【shù】（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按照说明书的操作【zuò】进行，试【shì】验【yàn】结果判定必须以酶标【biāo】仪读【dú】数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期：

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月