鸡卵黄1（VTG1）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96t

2.2µg/L -80µg/L

使用目的：

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中卵黄1（VTG1）含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡卵黄1（VTG1）    。用纯化的【de】鸡卵【luǎn】1（VTG1）抗体【tǐ】包被【bèi】微孔板，制成固【gù】相抗体，往包被单抗【kàng】的微【wēi】孔中依【yī】次加【jiā】入卵【luǎn】黄1（VTG1）抗体    ，形成抗体-抗原-酶标【biāo】抗体复合物，经过洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催【cuī】化下转化成蓝色，1（VTG1）呈正相原 1（VTG1），再【zài】与【yǔ】  HRP  标【biāo】记的卵黄并在酸的作用下【xià】转化【huà】成终的。颜色的深浅【qiǎn】和样品中的卵黄关。用【yòng】酶【méi】标仪在 450nm波【bō】长下测定吸光度（OD值），通过标【biāo】准【zhǔn】曲【qǔ】线计算样品中【zhōng】鸡卵黄原 1（VTG1）浓度【dù】。

试剂盒组成：

鸡卵黄1（VTG1）酶联免疫分析试剂盒标本要：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按【àn】相关文献进行【háng】，提【tí】取后应尽快进【jìn】行实验。若不【bú】能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含【hán】NaN3的样品，因   NaN3抑制【zhì】辣根过（HRP）活性。

操作步骤：

1.  标准品的稀释：本试【shì】剂盒提【tí】供原倍标准品一支，用【yòng】户【hù】可按照下列图表在小【xiǎo】试管中【zhōng】进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照【zhào】孔不加样【yàng】品及【jí】酶【méi】标试剂，其余各步【bù】操作相【xiàng】同）、标准孔、1待测样【yàng】品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔【kǒng】中先【xiān】加样品稀释【shì】液 40μl，然后再加【jiā】待测样品 10μl（样品【pǐn】终【zhōng】稀【xī】释度为 5倍）。加【jiā】样将样【yàng】品加于酶【méi】标板孔底部，尽量不【bú】触及孔壁，轻【qīng】轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体【tǐ】，甩干，每孔加【jiā】满【mǎn】洗涤液，静置 30秒后弃去【qù】，如此重【chóng】复 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每【měi】孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色【sè】剂 B50μl，轻轻震【zhèn】荡混匀，37℃避【bì】光显色15分钟。

10.终止：每孔加【jiā】终【zhōng】止液    50μl，终止反【fǎn】应（此时【shí】蓝色立转）。

11.测定：以【yǐ】空白空调【diào】零，450nm波长依序测量各孔的【de】吸光度【dù】（OD 值）。测【cè】定应在加终止液【yè】后 15分钟以内进【jìn】行。

操作程序总：

计算：

以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准【zhǔn】物的浓度与【yǔ】  OD值计算出标【biāo】准曲【qǔ】线【xiàn】的直线回归方程式【shì】，将【jiāng】样品的 OD值代【dài】入方程式，计算【suàn】出【chū】样品浓度，再乘【chéng】以稀释倍【bèi】数，即为样品【pǐn】的【de】实际浓【nóng】度。

鸡卵黄1（VTG1）酶联免疫分析试剂盒注意事项：

1．试【shì】剂盒【hé】从冷藏环境中取出应【yīng】在室温平衡 9-22分钟【zhōng】后方可使【shǐ】用，酶标【biāo】包被板开封后【hòu】如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。

3．各步加样均应【yīng】使用加样【yàng】器【qì】，并经【jīng】常校对其准确【què】性，以避免试验误【wù】差。一次加样时间【jiān】好

控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次【cì】测【cè】定【dìng】的同时做标准曲线，好做复【fù】孔。如标本中待测物质含量过高【gāo】（样本  OD值

大于标准品孔孔的 OD值），请【qǐng】先用样品【pǐn】稀释液稀【xī】释一【yī】定倍【bèi】数（n倍）后再测【cè】定，计

算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期：

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月