大鼠水通道蛋白2（AQP2）酶联免疫分析试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

15 ng/L -360 ng/L

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测定大鼠血【xuè】清、血浆及相【xiàng】关液【yè】体样本中【zhōng】水通道蛋白【bái】 2（AQP2）含量。

实验原理：

本试【shì】剂盒【hé】应【yīng】用【yòng】双【shuāng】抗体夹【jiá】心法测定【dìng】标本中大鼠水通道蛋白  2（AQP2）水平。用纯化的大鼠【shǔ】水通道蛋【dàn】白  2（AQP2）抗体包被微孔板，制成固相抗【kàng】体，往包被单抗的微孔中依次【cì】加入水【shuǐ】通道蛋【dàn】白 2（AQP2），再与 HRP标记的【de】水通道蛋白  2（AQP2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标【biāo】抗【kàng】体复合【hé】物。TMB在   HRP酶的催化下转【zhuǎn】化成【chéng】蓝色【sè】，并在【zài】酸的作用下转化成终的【de】。颜色【sè】的深浅和样品中的水通道蛋【dàn】白  2（AQP2）呈【chéng】正相关【guān】。用酶标仪在 450nm波长【zhǎng】下测定吸光度（OD值【zhí】），通过标准曲线计【jì】算样品中大鼠水通道蛋白 2（AQP2）浓【nóng】度。

试剂盒组成：

大鼠水通道蛋白2（AQP2）酶联免疫分析试剂盒标本要求：

1．标本【běn】采集后【hòu】尽早进【jìn】行【háng】提取，提【tí】取按相关【guān】文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验【yàn】，可将标本放于-20℃保存，但【dàn】应避免反【fǎn】复【fù】冻融

2．不【bú】能检【jiǎn】测含NaN3的样品，因   NaN3抑【yì】制辣根过氧化【huà】物酶【méi】的（HRP）活性。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提【tí】供【gòng】原倍标【biāo】准品【pǐn】一支，用户可按照下【xià】列图表在小【xiǎo】试管中进行稀释。

2.  加样：分别设空白孔（空【kōng】白对照孔不【bú】加【jiā】样【yàng】品及酶标试剂，其余各步操【cāo】作相同【tóng】）、标准孔、待测样品孔【kǒng】。在酶【méi】标包被板上标准品准【zhǔn】确加样 50µl，待【dài】测【cè】样品孔中【zhōng】先加样品稀释液 40µl，然后【hòu】再加待【dài】测【cè】样品 10µl（样【yàng】品zui终稀释【shì】度【dù】为 5倍【bèi】）。加样将样品加于酶标板孔【kǒng】底部，尽量【liàng】不触及【jí】孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30倍浓    30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩【shuǎi】干，每孔加【jiā】满洗涤液，静重复 5次，30秒后弃【qì】去，如此【cǐ】 拍干【gàn】。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先【xiān】加入显【xiǎn】色【sè】剂 A50µl，再加入显【xiǎn】色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分【fèn】钟.

10.终止：每孔加终止【zhǐ】液    50µl，终【zhōng】止反应（此时蓝【lán】色立转）。

11.测定：以【yǐ】空白空调零，450nm波长依序测量各【gè】孔的【de】吸光【guāng】度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以【yǐ】内进行。

操作程序总结：

大鼠水通道蛋白2（AQP2）酶联免疫分析试剂盒计算：

以标【biāo】准物的浓度为横坐【zuò】标， OD值为纵坐【zuò】标，在坐标纸上绘出【chū】标准曲线【xiàn】，根【gēn】据样品的OD值由标【biāo】准曲【qǔ】线查出相应【yīng】的浓度；再乘以稀释倍数【shù】；或用标准物【wù】的浓度与  OD值计算出标准曲线【xiàn】的直线【xiàn】回归【guī】方程式，将【jiāng】样品的 OD值代【dài】入方程【chéng】式，计算出样品【pǐn】浓度，再乘以【yǐ】稀释倍数，即为样品的【de】实际浓度。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境【jìng】中取出应在【zài】室【shì】温【wēn】平衡 9-22分钟后方可【kě】使用，酶标包被板开【kāi】封后如【rú】未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗【xǐ】涤液【yè】可能会有结晶析出，稀释时可在水【shuǐ】浴【yù】中【zhōng】加温助溶，洗涤【dí】时不影响结果。

3．各步加样均应使【shǐ】用加样器【qì】，并经常校对其【qí】准确性，以避免【miǎn】试验误差【chà】。一次加【jiā】样时间好

控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔【kǒng】。如标本【běn】中【zhōng】待测物质【zhì】含【hán】量【liàng】过高（样本  OD值【zhí】

大于标【biāo】准品孔孔的 OD值），请先用样【yàng】品稀释液【yè】稀释【shì】一【yī】定倍数（n倍）后再测定，计

算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明【míng】书【shū】的操作进行【háng】，试验结果判定【dìng】必须【xū】以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期：

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月