小鼠内皮素转化酶1(ECE1)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

7pg/ml-260pg/ml

使用目的：

本试【shì】剂盒用于测定小鼠【shǔ】血清，血浆及相关液【yè】体样本中内皮素转化酶【méi】1(ECE1)含量。

实验原理

本试剂【jì】盒应用双抗体【tǐ】夹【jiá】心【xīn】法测定标本中小鼠内皮【pí】素【sù】转化酶1(ECE1)水【shuǐ】平。用纯【chún】化的小鼠内皮素转化酶【méi】1(ECE1)抗体包被微孔【kǒng】板【bǎn】，制成固相抗体【tǐ】，往包被单抗的微【wēi】孔中依次加入内皮素转化酶1(ECE1)，再与HRP标记的内皮素转化酶1(ECE1)抗体结合，形【xíng】成【chéng】抗体-抗原-酶标抗体复合物。TMB在HRP酶的【de】催化下转化【huà】成蓝色，并在酸的【de】作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的【de】内皮【pí】素【sù】转化酶1(ECE1)呈【chéng】正【zhèng】相关。用酶标仪【yí】在450nm波【bō】长下测定吸光度（OD值），通过标准【zhǔn】曲【qǔ】线【xiàn】计【jì】算样品中小鼠内皮【pí】素转【zhuǎn】化酶【méi】1(ECE1)浓度。 

试剂盒组成 

标本要求 

1．标本采【cǎi】集后【hòu】尽早【zǎo】进【jìn】行提取，提取按【àn】相关【guān】文献【xiàn】进行，提取后【hòu】应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本【běn】放于-20℃保存，但应避免反复冻融【róng】

2．不能检【jiǎn】测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根【gēn】过氧化【huà】物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本【běn】试剂盒提供原倍标准品一支【zhī】，用户可按照下列图表【biǎo】在小试管中【zhōng】进【jìn】行稀释【shì】。

2.加样：分【fèn】别【bié】设空白孔（空白对照孔不加样【yàng】品及酶标试剂【jì】，其余各步操作【zuò】相【xiàng】同）、标准孔、待【dài】测样品孔。在【zài】酶【méi】标包被板上标准品准确加【jiā】样50μl，待测样品孔中【zhōng】先加样品稀释液40μl，然后【hòu】再加待【dài】测【cè】样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样【yàng】将样【yàng】品【pǐn】加于酶标【biāo】板孔底【dǐ】部，尽量不触及孔壁，轻轻【qīng】晃【huǎng】动混匀【yún】。

3.温育：用封板膜【mó】封板【bǎn】后【hòu】置37℃温育【yù】30分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封【fēng】板膜，弃【qì】去液【yè】体，甩干，每孔加【jiā】满洗涤液，静【jìng】置30秒【miǎo】后弃【qì】去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先【xiān】加入【rù】显色剂A50μl，再加入显色【sè】剂【jì】B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀，37℃避光【guāng】显【xiǎn】色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测【cè】量各孔【kǒng】的吸光度（OD值）。 测定【dìng】应在加【jiā】终止【zhǐ】液后15分钟【zhōng】以内进行【háng】。

小鼠内皮素转化酶1(ECE1)ELISA试剂盒操作程序总结：

计算

以标准【zhǔn】物【wù】的【de】浓【nóng】度为横坐标，OD值【zhí】为纵【zòng】坐标【biāo】，在坐标纸上绘出标【biāo】准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的【de】浓度；再乘【chéng】以稀释倍数；或用【yòng】标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的【de】直线【xiàn】回归方程式【shì】，将样品的OD值代入方程式【shì】，计算出样【yàng】品浓度，再乘以【yǐ】稀【xī】释【shì】倍数，即为样品的实际浓度【dù】。 

注意事项

1．试剂盒从【cóng】冷藏环境中【zhōng】取出应在室温平衡9-22分钟后方【fāng】可使用【yòng】，酶标包【bāo】被板开封后如未用完，板【bǎn】条应装【zhuāng】入密封袋中保存【cún】。

2．浓洗涤液可能【néng】会有结晶【jīng】析出，稀释时可在【zài】水浴中加温助溶，洗涤【dí】时不影响结果。

3．各步加样均【jun1】应使用加【jiā】样器【qì】，并经【jīng】常校对其准确性，以避免【miǎn】试验【yàn】误差。一次【cì】加样时间好控制【zhì】在5分钟内，如标本数量多【duō】，推荐使用排枪加样。

4．请每次【cì】测定【dìng】的同时做【zuò】标准曲线，好【hǎo】做复孔。如标本【běn】中待测【cè】物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请【qǐng】先用样品稀释液【yè】稀释一定【dìng】倍数（n倍【bèi】）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍【bèi】数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说明书的操作进行，试验结果判【pàn】定必【bì】须以酶标仪【yí】读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

小鼠【shǔ】内皮【pí】素转化酶1(ECE1)ELISA试【shì】剂盒保存条件及有效期【qī】

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月