小鼠类风湿因子(RF)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

0.8U/L -40 U/L

使用目的：

本试剂【jì】盒用于【yú】测定小鼠血清、血浆及【jí】相关液体样【yàng】本中【zhōng】类风湿因子(RF)含量。

实验原理

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本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本【běn】中小【xiǎo】鼠类风【fēng】湿因子(RF)水平。用纯化的小鼠类风湿【shī】因子(RF)抗【kàng】体包被微孔板，制成固相抗体【tǐ】，往【wǎng】包被【bèi】单抗的微孔中依次加【jiā】入【rù】类风湿因子(RF)，再【zài】与HRP标记的类风湿【shī】因【yīn】子(RF)抗体结合，形成【chéng】抗体【tǐ】-抗【kàng】原-酶标抗体复【fù】合物。TMB在HRP酶的催化下转【zhuǎn】化成蓝色，并【bìng】在酸的作用下转化成终的。颜色【sè】的深【shēn】浅和样品中的类【lèi】风湿【shī】因子(RF)呈正【zhèng】相关。用酶标【biāo】仪在450nm波【bō】长下测定【dìng】吸光【guāng】度（OD值【zhí】），通过标准曲线【xiàn】计【jì】算样【yàng】品中小鼠类风湿因子(RF)浓度。 

试剂盒组成 

小鼠类风湿因子(RF)ELISA试剂盒标本要求 

1．标本采集后尽早【zǎo】进行提取，提取【qǔ】按相关【guān】文【wén】献进行，提取后应尽快进行【háng】实验。若不能马【mǎ】上进行试验【yàn】，可将标本放于-20℃保存，但应【yīng】避【bì】免反复【fù】冻融

2．不能检测含NaN3的【de】样【yàng】品，因NaN3抑制【zhì】辣根过氧化物酶的（HRP）活【huó】性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提【tí】供原【yuán】倍标【biāo】准品一支，用户可【kě】按照下列图表在小【xiǎo】试管中进行【háng】稀释。

2.加样：分别【bié】设空白【bái】孔（空白对【duì】照孔不加【jiā】样品【pǐn】及酶标试剂，其余各【gè】步【bù】操作相同【tóng】）、标准孔、待测【cè】样品孔。在酶标包被【bèi】板【bǎn】上标【biāo】准品准【zhǔn】确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液【yè】40μl，然后再加待测样品10μl（样【yàng】品终稀释度【dù】为5倍）。加样【yàng】将【jiāng】样品加于酶标【biāo】板孔【kǒng】底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动【dòng】混匀。

3.温育：用封板膜封【fēng】板【bǎn】后置37℃温育30分【fèn】钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液【yè】体，甩【shuǎi】干，每孔加满【mǎn】洗涤液，静【jìng】置30秒后弃去【qù】，如【rú】此重复【fù】5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂【jì】B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀【yún】，37℃避【bì】光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以【yǐ】空白【bái】空调零，450nm波长依序【xù】测量各孔的吸光度（OD值）。 测定【dìng】应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

小鼠类风湿因子(RF)ELISA试剂盒计算

以【yǐ】标准物【wù】的浓度为横坐标，OD值为纵坐标【biāo】，在坐标【biāo】纸上绘出标准曲线，根据样【yàng】品的OD值由标准曲【qǔ】线查出相应的【de】浓度；再乘以【yǐ】稀释倍数【shù】；或【huò】用标准物【wù】的【de】浓度【dù】与【yǔ】OD值计算出标准曲线的直【zhí】线回归方【fāng】程式，将样品的OD值代入【rù】方程式，计算出样品【pǐn】浓【nóng】度【dù】，再【zài】乘以稀释倍数，即【jí】为样品的实际浓度。 

注意事项

1．试剂盒【hé】从冷藏环境中【zhōng】取出应在【zài】室温平衡【héng】9-22分钟后方可使用，酶【méi】标包被【bèi】板开【kāi】封后如未用完【wán】，板条应装入【rù】密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结【jié】晶析出，稀释时可【kě】在【zài】水浴中加温助溶，洗涤【dí】时【shí】不影【yǐng】响结果。

3．各步加【jiā】样均应使【shǐ】用加样器【qì】，并经常校对其准确性，以避免试【shì】验误差。一次【cì】加样时间好【hǎo】控制在5分钟内，如标【biāo】本数量多【duō】，推荐使【shǐ】用排枪加【jiā】样。

4．请每次【cì】测【cè】定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样【yàng】本OD值大【dà】于【yú】标【biāo】准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀【xī】释【shì】一定倍数（n倍）后再【zài】测定，计【jì】算时【shí】请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的【de】操作【zuò】进行，试验结果【guǒ】判定【dìng】必须以酶标仪读数【shù】为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月