人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

10 ng/L -400 ng/L

使用目的：

本试【shì】剂【jì】盒【hé】用于测定人血清【qīng】、血浆【jiāng】及相关【guān】液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人【rén】γ干【gàn】扰素(IFN-γ)水平。用纯化的人γ干扰素(IFN-γ)抗体包被【bèi】微孔板，制成【chéng】固相抗体，往包被单抗的微【wēi】孔中依次加【jiā】入【rù】γ干【gàn】扰【rǎo】素(IFN-γ)，再与【yǔ】HRP标记的【de】γ干【gàn】扰素(IFN-γ)抗【kàng】体结【jié】合，形成抗体【tǐ】-抗【kàng】原-酶标抗体复合物。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在【zài】酸【suān】的【de】作用下转化成终的。颜色【sè】的深浅和【hé】样品中的【de】γ干【gàn】扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标【biāo】仪在450nm波【bō】长下测【cè】定吸光度（OD值），通【tōng】过标准曲线计算样品【pǐn】中人γ干扰【rǎo】素【sù】(IFN-γ)浓度。 

试剂盒组成 

人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫【yì】分析【xī】试【shì】剂盒标【biāo】本要求 

1．标本采集后尽【jìn】早进行提取，提【tí】取【qǔ】按相【xiàng】关文献进行【háng】，提取【qǔ】后应尽快进行实验。若不能【néng】马上进【jìn】行试验，可将标本放于-20℃保【bǎo】存【cún】，但应避免【miǎn】反复【fù】冻融

2．不【bú】能检测含NaN3的样【yàng】品，因NaN3抑制【zhì】辣根【gēn】过【guò】氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试【shì】剂盒提供原倍标【biāo】准品一支，用户【hù】可按照下列图【tú】表在小试管【guǎn】中进【jìn】行稀释。

2.加样：分别设空白【bái】孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂【jì】，其余各步操作相同）、标准孔、待测样【yàng】品孔。在酶标包被【bèi】板【bǎn】上标准【zhǔn】品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释【shì】液40μl，然后再加【jiā】待测【cè】样品10μl（样【yàng】品终稀释度【dù】为5倍）。加样将样品【pǐn】加【jiā】于酶标板孔底部【bù】，尽量不触及孔【kǒng】壁，轻【qīng】轻晃动混匀。

3.温育：用封【fēng】板【bǎn】膜封板【bǎn】后置37℃温育30分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃去液【yè】体，甩干，每【měi】孔加【jiā】满洗涤液，静【jìng】置【zhì】30秒后弃【qì】去，如此重复5次，拍【pāi】干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再【zài】加入显【xiǎn】色【sè】剂B50μl，轻轻震荡【dàng】混匀，37℃避光显色【sè】15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空白空调零【líng】，450nm波长【zhǎng】依序测【cè】量各孔的吸光度（OD值）。 测定【dìng】应在加终止液后15分【fèn】钟以内进行。

人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒操作程序总结：

计算

以标【biāo】准物的浓度为横坐【zuò】标，OD值为纵坐标【biāo】，在坐标纸上绘出标准曲线，根【gēn】据样品的OD值【zhí】由标准曲线查出相应的浓【nóng】度；再乘以稀释倍【bèi】数【shù】；或【huò】用标准【zhǔn】物的浓度与OD值计算出标准曲线的【de】直【zhí】线【xiàn】回归方【fāng】程式，将样【yàng】品的OD值代入【rù】方【fāng】程式【shì】，计算出样品浓度【dù】，再乘以稀释倍数，即【jí】为样【yàng】品的实际浓度。 

注意事项

1．试【shì】剂盒从冷藏环境中取出应【yīng】在室温平衡9-22分【fèn】钟后方可【kě】使用，酶标【biāo】包被板开【kāi】封后如未用完，板条应【yīng】装入密封【fēng】袋中保【bǎo】存【cún】。

2．浓洗涤液可能会有【yǒu】结【jié】晶析出【chū】，稀释时【shí】可在水浴中加温助溶，洗【xǐ】涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各【gè】步加样均应使用【yòng】加【jiā】样器【qì】，并经常校对其准确【què】性，以避免试验误差。一【yī】次加样时间好控制在5分钟内，如【rú】标本数量多，推荐使【shǐ】用排【pái】枪加样【yàng】。

4．请每次测定的【de】同时做标准曲线，好做复孔【kǒng】。如标本【běn】中待【dài】测物质含量过高【gāo】（样本OD值大于标准品【pǐn】孔孔的OD值），请先【xiān】用样品稀释液稀【xī】释一定倍数（n倍）后再测【cè】定【dìng】，计【jì】算【suàn】时请后乘以总稀释倍数【shù】（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说明书的操作进【jìn】行【háng】，试验结【jié】果判【pàn】定必须【xū】以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月