鸡甲状腺素(T4)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

3µg/L - 80µg/L

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测【cè】定鸡血清、血浆【jiāng】及相关液体【tǐ】样本【běn】中甲状腺素(T4)含量。

实验原理
本【běn】试剂盒应用双抗体夹心法测定【dìng】标本【běn】中鸡甲状腺【xiàn】素(T4)。用纯化【huà】的鸡【jī】甲状腺素(T4)抗体包被微孔板，制成固【gù】相【xiàng】抗体【tǐ】，往包被单【dān】抗的微【wēi】孔中依次【cì】加入甲状腺素 (T4)，再与  HRP标【biāo】记的【de】甲状腺素 (T4)抗体    ，形【xíng】成抗体 -抗原-酶标抗体复合【hé】物。TMB 在 HRP  酶的催化【huà】下转化【huà】成蓝色【sè】，并在【zài】酸的作用下【xià】转化成终的。颜色的深【shēn】浅【qiǎn】和样品中的【de】甲【jiǎ】状腺素(T4)呈正相关。用酶【méi】标仪在 450nm波长下测定吸光度【dù】（OD值），通过标【biāo】准【zhǔn】曲【qǔ】线计算样品中鸡【jī】甲状腺素(T4)浓【nóng】度。

试剂盒组成

标本要

1．标本采集后【hòu】尽早进行【háng】提取，提【tí】取按【àn】相关文【wén】献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含【hán】NaN3的样品，因   NaN3抑制【zhì】辣根过（HRP）活性。

鸡甲状腺素(T4)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1.  标准品的稀释【shì】：本试剂盒提供原倍标准【zhǔn】品一支，用户可【kě】按照下列图表【biǎo】在【zài】小试【shì】管中进行稀释。

2.加样：分别【bié】设空白孔（空白对照孔不加样品【pǐn】及酶【méi】标试剂，其余【yú】各步操作相同）、标准孔、1待【dài】测样品孔。在酶标包被板上【shàng】标准品准确加样【yàng】 50μl，待测样品【pǐn】孔【kǒng】中先加样【yàng】品稀【xī】释液【yè】 40μl，然后再【zài】加【jiā】待测样品 10μl（样品终稀释度为 5倍）。加样将样品加【jiā】于酶【méi】标板孔底部，尽量不触及孔【kǒng】壁，轻轻晃动【dòng】混【hún】匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满【mǎn】洗涤液【yè】，静置 30秒【miǎo】后【hòu】弃去，如此重复【fù】 5次【cì】，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先【xiān】加入【rù】显【xiǎn】色剂【jì】 A50μl，再加入显色【sè】剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分【fèn】钟。

10.终止：每孔加终【zhōng】止液    50μl，终止【zhǐ】反应（此【cǐ】时蓝色立转）。

11.测定：以空【kōng】白【bái】空调零，450nm波长依【yī】序测量各孔的吸光度（OD 值【zhí】）。测定应在加终止【zhǐ】液后 15分钟【zhōng】以内【nèi】进行。

操作程序总：

计算

以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品【pǐn】的OD值由标准曲线查出相应的【de】浓度【dù】；再乘以稀释【shì】倍数；或用标准物的浓度与  OD值计【jì】算出【chū】标【biāo】准曲【qǔ】线的直线回归方程【chéng】式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品【pǐn】浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际【jì】浓度【dù】。

鸡甲状腺素(T4)酶联免疫分析试剂盒注意事项

1．试【shì】剂盒从冷藏【cáng】环境中【zhōng】取出应在室温平【píng】衡 9-22分钟后方可使用，酶【méi】标包被板开【kāi】封后如【rú】未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有

析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。

3．各步加样【yàng】均应【yīng】使用加样器【qì】，并经常【cháng】校对其【qí】准确【què】性，以避免试【shì】验误差。一次加样时【shí】间好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同【tóng】时做标准曲线，好做复孔。如标本【běn】中待测物质含【hán】量过高（样本【běn】  OD值【zhí】大于标【biāo】准品孔【kǒng】孔的 OD值），请先用样品稀释液【yè】稀【xī】释一定【dìng】倍数（n倍【bèi】）后再测【cè】定，计【jì】算【suàn】时请【qǐng】后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月