小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)ELISA试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

300pg/ml - 8000pg/ml

使用目的：

本试【shì】剂盒用于测定【dìng】小【xiǎo】鼠血清【qīng】、血浆及相关【guān】液【yè】体样本中基质金属【shǔ】蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)含量。

实验原理

本试剂盒应【yīng】用双抗【kàng】体【tǐ】夹心【xīn】法测定标本中小【xiǎo】鼠基质金属【shǔ】蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)水平。用纯化的小鼠【shǔ】基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抗体包【bāo】被微【wēi】孔板，制【zhì】成【chéng】固相抗体，往包被单抗的【de】微【wēi】孔中依次加入基质【zhì】金【jīn】属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)，再【zài】与HRP标记的基质金【jīn】属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抗【kàng】体结合，形成抗【kàng】体【tǐ】-抗原-酶【méi】标抗体复合物，TMB在【zài】HRP酶的催化下【xià】转化成蓝色，并在酸的作【zuò】用下转化【huà】成【chéng】终的。颜色【sè】的深浅【qiǎn】和样品【pǐn】中的【de】基质金【jīn】属蛋白酶抑【yì】制剂-2(TIMP-2)呈【chéng】正相关。用【yòng】酶标仪在450nm波长下测定吸【xī】光度（OD值），通过标准曲线【xiàn】计算样品中小鼠基质金属蛋【dàn】白酶抑制剂【jì】-2(TIMP-2)浓度【dù】。 

小鼠基【jī】质金属【shǔ】蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)ELISA试剂盒试剂盒【hé】组成【chéng】 

标本要求 

1．标本采集后尽【jìn】早进【jìn】行提【tí】取，提取按相关文献进行，提取【qǔ】后应【yīng】尽快进行【háng】实验。若不【bú】能马【mǎ】上进【jìn】行试验，可将【jiāng】标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含【hán】NaN3的样品，因【yīn】NaN3抑制辣根过氧化物酶【méi】的（HRP）活【huó】性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本【běn】试【shì】剂盒【hé】提供原倍标准品一支，用户可按照下列【liè】图表在小试【shì】管中进【jìn】行稀释。

2.加样：分别设空白孔【kǒng】（空白【bái】对照孔不加样品及酶标试剂，其【qí】余各【gè】步操作【zuò】相【xiàng】同）、标准【zhǔn】孔、待测样品孔。在酶【méi】标包被板上【shàng】标准品准确【què】加样【yàng】50μl，待测样品孔中先加样品【pǐn】稀释液40μl，然后【hòu】再加待测【cè】样品10μl（样品终稀释度为【wéi】5倍）。加样将样品【pǐn】加于酶标【biāo】板孔【kǒng】底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板【bǎn】膜封板后【hòu】置37℃温育30分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心【xīn】揭掉封板膜，弃去液体【tǐ】，甩【shuǎi】干，每孔加满洗【xǐ】涤液，静置【zhì】30秒后【hòu】弃去，如此重复5次，拍干【gàn】。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入【rù】显色剂【jì】B50μl，轻轻震荡【dàng】混匀，37℃避光显色10分【fèn】钟【zhōng】.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空【kōng】白空【kōng】调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测【cè】定【dìng】应在【zài】加终止液后15分钟以【yǐ】内进行。

操作程序总结：

小鼠基【jī】质金属蛋白酶【méi】抑制剂【jì】-2(TIMP-2)ELISA试剂【jì】盒计算

以标准物的浓度为横【héng】坐标，OD值为纵【zòng】坐标，在坐【zuò】标【biāo】纸上绘出标准【zhǔn】曲线，根据【jù】样品的【de】OD值由标【biāo】准曲【qǔ】线查出相【xiàng】应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线【xiàn】的直【zhí】线回【huí】归方程【chéng】式，将样品的OD值代【dài】入方程【chéng】式，计算【suàn】出样品浓度，再【zài】乘以稀释倍数【shù】，即为样品的实际浓度【dù】。 

注意事项

1．试剂盒从冷【lěng】藏环境中取出应在室【shì】温平衡9-22分钟后【hòu】方可使用，酶【méi】标包被板【bǎn】开封后如未【wèi】用完，板条应装入【rù】密封袋中保【bǎo】存。

2．浓洗涤【dí】液可能会有【yǒu】结晶【jīng】析出，稀【xī】释时可在水浴中加温【wēn】助溶，洗【xǐ】涤时不影响结果。

3．各步加样均【jun1】应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误【wù】差。一【yī】次加样时间好【hǎo】控制在5分钟内，如标【biāo】本数量【liàng】多，推荐【jiàn】使【shǐ】用【yòng】排枪加【jiā】样。

4．请每次测定的同时【shí】做标准【zhǔn】曲线，好做复孔。如【rú】标本中待测物【wù】质含量过【guò】高（样本OD值大【dà】于标【biāo】准【zhǔn】品【pǐn】孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释【shì】一定【dìng】倍数（n倍）后再测定，计【jì】算时请后乘【chéng】以总稀【xī】释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说明书的操作进行，试验结果判定必【bì】须以【yǐ】酶标仪【yí】读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

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1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月