小鼠肌钙蛋白(Tn)ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
10ng/L - 400ng/L

使用目的：
本试【shì】剂盒【hé】用【yòng】于【yú】测定小【xiǎo】鼠血清、血浆及相关液体样本【běn】中肌钙蛋白(Tn)含量。

实验原理
本试剂盒应用双【shuāng】抗体夹【jiá】心【xīn】法测定标本中【zhōng】小【xiǎo】鼠肌钙蛋白【bái】(Tn)水平。用纯【chún】化【huà】的小鼠【shǔ】肌钙蛋白(Tn)抗体包被微【wēi】孔板，制成固相抗体，往【wǎng】包被单抗的微孔中依次加【jiā】入【rù】肌钙【gài】蛋白(Tn)，再与【yǔ】HRP标记的肌钙蛋白(Tn)抗体【tǐ】结合，形成抗体-抗原【yuán】-酶【méi】标抗【kàng】体【tǐ】复合物【wù】，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在【zài】HRP酶的催化【huà】下转化成蓝色，并在酸的作用下转【zhuǎn】化【huà】成终的。颜色的深浅和样【yàng】品中的肌钙蛋白(Tn)呈【chéng】正相关。用酶标仪在450nm波长下测定【dìng】吸光度【dù】（OD值），通过标准曲线计【jì】算样【yàng】品中小鼠肌钙蛋白【bái】(Tn)浓度。

试剂盒组成

小鼠肌钙蛋白(Tn)ELISA试剂盒标本要求

1．标本采集后尽早【zǎo】进行提取，提取按相【xiàng】关【guān】文献进行，提【tí】取后应尽快进【jìn】行实验。若【ruò】不能【néng】马上【shàng】进行试验，可将标【biāo】本放于-20℃保存，但应【yīng】避免反复冻【dòng】融

2．不【bú】能检测含NaN3的【de】样品，因NaN3抑制辣根【gēn】过【guò】氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原【yuán】倍标【biāo】准【zhǔn】品一支，用户可按照下【xià】列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白【bái】对照孔不加【jiā】样品及酶【méi】标试剂，其余各步【bù】操作【zuò】相同）、标准【zhǔn】孔、待【dài】测样【yàng】品【pǐn】孔。在【zài】酶【méi】标包被板【bǎn】上标准品准确【què】加样50μl，待测样【yàng】品孔中【zhōng】先加样品稀释【shì】液40μl，然后再【zài】加【jiā】待测样品【pǐn】10μl（样品终稀释【shì】度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔【kǒng】壁，轻轻晃动【dòng】混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液【yè】，静【jìng】置30秒【miǎo】后【hòu】弃去【qù】，如此重复5次，拍【pāi】干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先【xiān】加入显色剂【jì】A50μl，再【zài】加入显色剂B50μl，轻轻【qīng】震荡混【hún】匀，37℃避【bì】光显色15分【fèn】钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空【kōng】白空调零【líng】，450nm波长依序测量【liàng】各孔的吸光度（OD值【zhí】）。 测【cè】定应在加终止液后15分钟以内【nèi】进行【háng】。

小鼠肌钙蛋白(Tn)ELISA试剂盒操作程序总结：

计算
以标准物的浓【nóng】度为横【héng】坐标【biāo】，OD值为纵【zòng】坐标，在坐标纸上绘【huì】出标【biāo】准曲线，根据样【yàng】品【pǐn】的OD值由【yóu】标准曲线【xiàn】查出相应的浓度【dù】；再乘以稀释倍数；或【huò】用【yòng】标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直【zhí】线回归方程【chéng】式，将样品的OD值代入方程【chéng】式，计【jì】算出样品浓度【dù】，再【zài】乘以稀释倍数，即为【wéi】样品【pǐn】的实际浓度。

注意事项
1．试【shì】剂盒从冷藏环境【jìng】中取出应在【zài】室温平【píng】衡9-21分【fèn】钟后方可使用【yòng】，酶标包被【bèi】板开【kāi】封后如未用完，板【bǎn】条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有【yǒu】结晶析【xī】出，稀释时可【kě】在水【shuǐ】浴中加【jiā】温助溶【róng】，洗涤时不影响结果。

3．各【gè】步【bù】加样均应使用加【jiā】样器，并经常校【xiào】对其准确性，以避免试【shì】验【yàn】误【wù】差。一次加样时【shí】间好控制在5分钟内，如标本【běn】数量多【duō】，推荐使用排【pái】枪加样。

4．请每【měi】次测定的同时【shí】做标准曲线，好做复孔。如标【biāo】本中【zhōng】待测物【wù】质含【hán】量过高【gāo】（样本【běn】OD值大于标准品孔孔的OD值），请先【xiān】用样品稀【xī】释液稀释一定倍数（n倍）后【hòu】再【zài】测定，计算时【shí】请后乘以总稀释【shì】倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按照说明【míng】书【shū】的操【cāo】作进行，试验结果判定必须以酶标仪【yí】读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-21℃。

2．有效期：6个月