鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：

1.5ng/L - 48ng/L

使用目的：

本试剂盒【hé】用于测定【dìng】鸡【jī】血【xuè】清【qīng】、血【xuè】浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹【jiá】心法测定标本中【zhōng】鸡γ干【gàn】扰【rǎo】素(IFN-γ)水平。用纯化的鸡γ干扰素(IFN-γ)抗【kàng】体包被微孔【kǒng】板，制成固【gù】相抗体【tǐ】，往包被单抗的微孔中【zhōng】依次加【jiā】入【rù】γ干扰素【sù】(IFN-γ)，再与 HRP标【biāo】记的【de】γ干扰素(IFN-γ)抗【kàng】体结合【hé】，形成【chéng】抗【kàng】体-抗原-酶标抗体复合物，经【jīng】过洗涤后加底物 TMB显【xiǎn】色【sè】。TMB在   HRP酶的催化下转化成【chéng】蓝色，并在酸的作用下转化成终的【de】。颜色的深浅和样品中的【de】γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪【yí】在 450nm波长下测定吸光度（OD值【zhí】），通过标准【zhǔn】曲线计【jì】算样【yàng】品【pǐn】中鸡γ干扰素(IFN-γ)浓度。

试剂盒组成

鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒标本要求

1．标本采集【jí】后尽早进行【háng】提【tí】取，提取按相关【guān】文献进行，提取后应尽快进行实验【yàn】。若【ruò】不能马【mǎ】上进【jìn】行【háng】试验【yàn】，可将标【biāo】本放【fàng】于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测【cè】含NaN3的样【yàng】品【pǐn】，因   NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.  标准品的稀释：本试剂【jì】盒提【tí】供原倍标准品【pǐn】一支，用户【hù】可按照下列图表在小试管【guǎn】中进行稀【xī】释。

2.加样：分别【bié】设空【kōng】白孔（空【kōng】白【bái】对照孔不加样品及酶标试剂【jì】，其余各步操作相同）、标准孔【kǒng】、1待测样品孔。在酶标包被板上标准【zhǔn】品准确【què】加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后【hòu】再加待测【cè】样品 10μl（样品【pǐn】终稀释度【dù】为【wéi】 5倍）。加【jiā】样将【jiāng】样品【pǐn】加于【yú】酶标【biāo】板孔底部，尽量不触及【jí】孔【kǒng】壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心【xīn】揭掉封板【bǎn】膜，弃去液体，甩【shuǎi】干，每【měi】孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如【rú】此重复 5次，拍【pāi】干【gàn】。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每【měi】孔【kǒng】先【xiān】加【jiā】入显色【sè】剂 A50μl，再加入【rù】显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色【sè】15分【fèn】钟。

10.终止：每孔加【jiā】终止液    50μl，终止【zhǐ】反应（此时蓝色【sè】立转）。

11.测定：以【yǐ】空白空调零，450nm波长依序测量各【gè】孔的吸光【guāng】度【dù】（OD 值）。测定应在加终【zhōng】止液后【hòu】 15分钟以【yǐ】内进行。

操作程序总结：

鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒计算

以标准物的浓度【dù】为横坐标【biāo】， OD值为纵坐标，在【zài】坐标纸上【shàng】绘出标准曲【qǔ】线，根据样品的OD值【zhí】由标准曲线查出相应【yīng】的浓度；再【zài】乘以稀释倍【bèi】数；或用标准物【wù】的浓度与【yǔ】  OD值计算出标准曲【qǔ】线的【de】直线回归方【fāng】程式，将样品的【de】 OD值代入方程式，计算【suàn】出样【yàng】品浓度【dù】，再乘以稀释倍数，即为样品的实【shí】际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷【lěng】藏环境中【zhōng】取出应在室温平衡 9-22分钟【zhōng】后【hòu】方【fāng】可使用，酶标【biāo】包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可【kě】能会【huì】有结晶析出，稀释时可在水浴中【zhōng】加【jiā】温【wēn】助溶，洗涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经【jīng】常校对其【qí】准确【què】性，以【yǐ】避免试验误差。一【yī】次【cì】加【jiā】样时间好

控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次【cì】测定的同时做标【biāo】准【zhǔn】曲线，好做复【fù】孔。如【rú】标本中【zhōng】待测物质含量【liàng】过高（样本  OD值

大于【yú】标准【zhǔn】品孔孔【kǒng】的 OD值【zhí】），请【qǐng】先用样品稀释液稀【xī】释一定倍数（n倍）后再测定，计

算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行【háng】，试验结果判定必须以酶【méi】标仪读【dú】数为【wéi】准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：9-22℃。

2．有效期：6个月