大鼠 (Rat) 巨噬【shì】细胞炎【yán】性蛋白【bái】（MIP-1β）ELISA检【jiǎn】测试剂盒

本试剂仅供研究使用  标本：血清或血浆

试验原理：

MIP-1β试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已【yǐ】知【zhī】MIP-1β浓度的标准品、未知【zhī】浓度【dù】的样品加入【rù】微孔酶标【biāo】板内进【jìn】行检【jiǎn】测。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再【zài】经过温【wēn】育和洗涤【dí】，去除未结合的酶【méi】结【jié】合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜【yán】色【sè】。颜色的深浅和样【yàng】品【pǐn】中MIP-1β的浓度呈比例【lì】关系【xì】。

试剂盒内容及其配制

自备材料

1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．避【bì】免直接接触终止液和底物【wù】A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用【yòng】水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1．试剂应按标签说明【míng】书【shū】储存，使用前恢【huī】复【fù】到室温。稀【xī】稀过【guò】后的【de】标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它【tā】试剂应包【bāo】装好或盖好【hǎo】。不同批号的【de】试剂不【bú】要混用。保【bǎo】质前使用。

4．使用一次【cì】性的吸头以免【miǎn】交【jiāo】叉污【wū】染，吸取终止液和底物A、B液时，避免【miǎn】使用带金属部【bù】分的【de】加样器。

5．使用干【gàn】净的塑料容器配置洗涤【dí】液。使用【yòng】前充分【fèn】混匀试剂盒里的【de】各种成份【fèn】及样【yàng】品。

6．洗【xǐ】涤酶标板时应充分拍【pāi】干，不要将吸水纸【zhǐ】直接放入酶标反应孔中【zhōng】吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖【gài】子。底物B对【duì】光敏【mǐn】感，避免长时间暴露于光【guāng】下【xià】。避免用【yòng】手接触，有毒。实验完成后应立即读取【qǔ】OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

大鼠 (Rat) 巨噬细胞炎性蛋白【bái】（MIP-1β）ELISA检测试【shì】剂盒样品收【shōu】集、处理及保存【cún】方法

1、血清-----操【cāo】作【zuò】过程中【zhōng】避免任何细胞【bāo】刺激。使用【yòng】不含热原和内毒素的试管。收集血【xuè】液后，1000×g离心10分钟【zhōng】将血清和红【hóng】细胞迅速小心地【dì】分离。

2、血【xuè】浆【jiāng】-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检【jiǎn】测。1000×g离【lí】心30分钟去除颗【kē】粒。

3、细胞上清液---1000×g离心【xīn】10分钟去【qù】除【chú】颗粒和聚合物【wù】。

4、保存------如果样【yàng】品不【bú】立即使【shǐ】用，应将【jiāng】其分【fèn】成小部分-70 ℃保存，避【bì】免【miǎn】反【fǎn】复冷冻。尽【jìn】可能的不要使用溶【róng】血或高血脂血。如果【guǒ】血清中大量颗【kē】粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解【jiě】冻。应在室温下【xià】解冻并确保样品均匀地【dì】充分解冻【dòng】。

试剂的准备

1．标准品：标准品【pǐn】的【de】系列稀释应【yīng】在实验时准备，不能储存。稀释前将【jiāng】标准品振荡【dàng】混匀【yún】。稀释比例按【àn】下表中进行：

2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1．使【shǐ】用前，将所【suǒ】有试剂充分混匀。不要使【shǐ】液体产生大量的【de】泡【pào】沫，以免加样时加【jiā】入【rù】大量的【de】气泡，产生加样上【shàng】的误差。

2．根据【jù】待测样品【pǐn】数量加上【shàng】标准品的数量决定所需的【de】板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔【kǒng】。每个样品根【gēn】据自己【jǐ】的数【shù】量来定【dìng】，能使用复【fù】孔【kǒng】的尽量【liàng】做复孔【kǒng】。

3．加【jiā】入【rù】稀释好后的标准品【pǐn】50ul于反应孔、加入待测【cè】样品50ul于反应孔内。盖上膜板，轻轻振【zhèn】荡【dàng】混【hún】匀【yún】，37℃温育1小时。

4．甩去孔【kǒng】内【nèi】液【yè】体，每【měi】孔加满洗涤液【yè】，振荡30秒【miǎo】，甩去洗【xǐ】涤【dí】液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如【rú】果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每【měi】孔加入【rù】80ul的【de】亲和链酶【méi】素-HRP，轻轻振荡混匀【yún】，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体【tǐ】，每孔加满洗涤液【yè】，振荡30秒，甩【shuǎi】去洗涤液，用吸水纸拍【pāi】干。重复【fù】此操作3次。如果【guǒ】用【yòng】洗板机洗涤【dí】，洗涤【dí】次数增加一次。

7．每孔加【jiā】入底【dǐ】物A、B各50ul，轻轻振【zhèn】荡混匀，37℃温育10分钟【zhōng】。避免【miǎn】光照。

8．取出【chū】酶标板【bǎn】，迅速加入【rù】50ul终止液，加入终止【zhǐ】液【yè】后应立即测定【dìng】结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准【zhǔn】曲【qǔ】线无法得【dé】到【dào】精确的【de】结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度【dù】：小的检测【cè】浓【nóng】度小于【yú】1号【hào】标【biāo】准品。稀释度【dù】的线性。样品线性回归与预期浓【nóng】度相关系数R值为【wéi】0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

大鼠【shǔ】 (Rat) 巨噬细胞炎【yán】性【xìng】蛋【dàn】白（MIP-1β）ELISA检测【cè】试剂盒结 果【guǒ】 判 断 与 分 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐【zuò】标（Y），相应的【de】MIP-1β标准品浓度为【wéi】横坐标（X），做得【dé】相应的【de】曲【qǔ】线，样【yàng】品的MIP-1β含量【liàng】可根据其【qí】OD值由【yóu】标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml