人 (Human) 血栓素A2（TXA2） ELISA 检【jiǎn】测试剂盒

本试剂仅供【gòng】研究【jiū】使用      标本：血【xuè】清或血浆【jiāng】

试验原理：

TXA2试【shì】剂盒是固【gù】相夹【jiá】心【xīn】法酶联【lián】免疫吸附实验（ELISA）.已知TXA2浓【nóng】度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行【háng】检【jiǎn】测。洗涤后，加入亲【qīn】和素标记过【guò】的HRP。再【zài】经过温育和洗涤，去【qù】除未结合的酶结【jié】合物，然后加入【rù】底物A、B，和【hé】酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅【qiǎn】和【hé】样品中TXA2的浓度【dù】呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

自备材料

1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．避免【miǎn】直接接触终止液和底物A、B。一旦接触【chù】到这些【xiē】液体，请【qǐng】尽快用水【shuǐ】冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1．试【shì】剂应按标签说明书储存，使用前恢【huī】复【fù】到室温。稀稀过后的标准【zhǔn】品【pǐn】应丢弃，不可保存【cún】。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂【jì】应包装好【hǎo】或盖好【hǎo】。不【bú】同批号的试剂不要混用。保【bǎo】质前使【shǐ】用。

4．使用一次【cì】性的吸头【tóu】以免交叉污染，吸取终【zhōng】止【zhǐ】液和底物A、B液【yè】时，避【bì】免使用【yòng】带金属部分【fèn】的加样器。

5．使【shǐ】用干净的【de】塑料容【róng】器配置洗涤液。使用前【qián】充分混匀试【shì】剂盒里【lǐ】的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍【pāi】干，不要将吸水【shuǐ】纸直【zhí】接放入酶标反应孔中【zhōng】吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子【zǐ】。底【dǐ】物【wù】B对光敏感，避免长【zhǎng】时间暴露于光【guāng】下。避【bì】免用手接触，有毒。实【shí】验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1、血清-----操【cāo】作过程中避免任何细胞【bāo】刺激【jī】。使【shǐ】用【yòng】不含热原和内毒素的【de】试管。收【shōu】集血【xuè】液后，1000×g离心10分钟【zhōng】将血清和红细胞迅速小心【xīn】地分【fèn】离。

2、血浆-----EDTA、柠檬【méng】酸盐、肝素【sù】血浆可用于检测【cè】。1000×g离心30分钟去【qù】除颗粒。

3、细【xì】胞上清【qīng】液---1000×g离【lí】心10分钟去除颗【kē】粒和聚合物。

4、组【zǔ】织匀【yún】浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取【qǔ】上【shàng】清液【yè】

5、保存------如【rú】果样品不【bú】立即【jí】使用，应将其分成【chéng】小部分-70 ℃保存，避【bì】免【miǎn】反复冷冻。尽可【kě】能【néng】的不要使用溶血或高血脂血【xuè】。如果血【xuè】清中大量颗粒，检测前先【xiān】离【lí】心或过滤。不要在37℃或更高的【de】温度【dù】加热解冻。应【yīng】在【zài】室温下解冻并确保样品均匀地充分【fèn】解冻【dòng】。

试剂的准备

1．标准品：标准品的【de】系列稀释应【yīng】在实【shí】验时准备，不能储存。稀释前将标【biāo】准品振荡混匀。稀释比例按【àn】下表中【zhōng】进【jìn】行：

2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1．使【shǐ】用【yòng】前，将所有试剂充分【fèn】混匀。不要使【shǐ】液体产生【shēng】大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡【pào】，产【chǎn】生【shēng】加样【yàng】上的误差【chà】。

2．根据待测样品数量【liàng】加上【shàng】标准品的【de】数【shù】量决定所需的板条数【shù】。每个标准品和【hé】空白孔建议做复孔。每个样品根据自【zì】己的数量来定，能【néng】使【shǐ】用复【fù】孔的【de】尽量做【zuò】复孔【kǒng】。标本用标本【běn】稀【xī】释液1：1稀释后【hòu】加入50ul于反应孔内。

3．加【jiā】入稀释好【hǎo】后【hòu】的标准【zhǔn】品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反【fǎn】应【yīng】孔内。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔【kǒng】内液体，每【měi】孔加满【mǎn】洗涤液【yè】，振荡30秒，甩去【qù】洗涤液，用吸水纸【zhǐ】拍【pāi】干。重复此操作3次。如果【guǒ】用洗板机洗涤，洗涤【dí】次数增加一【yī】次。

5．每孔加入【rù】80ul的亲和链【liàn】酶素-HRP，轻【qīng】轻振荡混匀，37℃温育30分钟【zhōng】。

6．甩去孔【kǒng】内液体，每【měi】孔加满洗涤液【yè】，振【zhèn】荡30秒【miǎo】，甩去洗涤液，用吸【xī】水【shuǐ】纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机【jī】洗涤，洗涤【dí】次数增加一【yī】次【cì】。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡【dàng】混匀【yún】，37℃温育10分钟。避免【miǎn】光【guāng】照。

8．取【qǔ】出酶【méi】标板，迅速加入50ul终止【zhǐ】液，加入终止【zhǐ】液【yè】后应立【lì】即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

人【rén】 (Human) 血栓素A2（TXA2） ELISA 检测试剂盒建【jiàn】议使用【yòng】的实【shí】验方案

局限

6号标准品以上的结果【guǒ】为【wéi】非线性【xìng】的，根据此标准【zhǔn】曲线无法得到精确【què】的结果【guǒ】。

试剂盒性能

1. 灵敏度：小的检测浓【nóng】度小【xiǎo】于【yú】1号标准品。稀释度的线性。样品【pǐn】线【xiàn】性回归与预期【qī】浓度相关系数【shù】R值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

人【rén】 (Human) 血栓素【sù】A2（TXA2） ELISA 检测试剂盒结 果 判 断 与 分【fèn】 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的TXA2标准品浓【nóng】度【dù】为横坐标（X），做得相应的曲【qǔ】线，样品的TXA2含量【liàng】可根据其OD值由标准【zhǔn】曲线换算出【chū】相应的浓【nóng】度【dù】。

3、检测值范围：9-22.0ng/ml

4、敏感度： 0.01 ng/ml