大【dà】家【jiā】在养细胞的时候，想必大【dà】家也一定遇【yù】到【dào】过细胞状态差这种情况，但【dàn】是【shì】细【xì】胞状态差，有很多【duō】种原因造成【chéng】。细胞状态很差【chà】，常常出现的现象是：细【xì】胞边【biān】缘不清晰【xī】、细胞不饱满、折光性差、背景比较【jiào】脏【zāng】、黑【hēi】点很多、细胞碎【suì】片多【duō】（细【xì】胞【bāo】凋亡后的细胞碎片【piàn】）、单个细胞内有【yǒu】空泡（凋亡）且空泡【pào】比较多；如果细胞出现【xiàn】老化，也就是细胞比【bǐ】较扁平、增【zēng】殖减缓、细胞核【hé】体积增大、细胞【bāo】突触变多，此时【shí】观察到的细胞状态也【yě】是【shì】不正常的【de】。所以，除了【le】考虑血清和【hé】细菌污染的问题，细胞老化也不【bú】容忽视【shì】~

细胞老化的征兆：

一、细胞周期阻滞

长期【qī】的细胞周期【qī】阻滞是老化细胞的【de】基本特征【zhēng】，也【yě】是体外鉴【jiàn】定细胞【bāo】老化的指标。为了检查细胞是否跃出【chū】了细胞周期，人们通常检测增殖指示分子【zǐ】Ki-67的表达丰【fēng】度；或者通【tōng】过将与胸腺嘧啶相【xiàng】似【sì】的溴【xiù】脱氧尿mi啶（Bromodeoxyuridine，BrdU）掺【chān】入到细胞培养基【jī】中，观【guān】察【chá】是否【fǒu】有新的DNA合成【chéng】。细胞老【lǎo】化主要表现为G1期【qī】阻滞，个别情况下【xià】也可伴随G2/M期周【zhōu】期阻滞，或【huò】直接由G2/M期阻滞诱发形成。

二、细胞形态改变

虽然【rán】由于细【xì】胞周期的【de】中断和DNA复【fù】制的停止，老化细胞内的DNA含量与【yǔ】正常细胞类似【sì】，但 RNA与蛋白质丰度【dù】均比【bǐ】正常细胞要明显【xiǎn】升高。这是【shì】因为，尽【jìn】管细胞进【jìn】入老化阶段后【hòu】蛋白质的整体合成速率【lǜ】降低，但是蛋白质的降解体【tǐ】系受到更【gèng】加明显的抑制，导致蛋白质在细胞内持【chí】续【xù】堆积。但【dàn】，由【yóu】于不同组织来源【yuán】的细胞【bāo】，其形态本就各不相同，因此，目前【qián】还【hái】并无客观的【de】、统【tǒng】一的【de】标准【zhǔn】从【cóng】细胞【bāo】形态判断并定义老化细胞。换【huàn】句话【huà】说，目前【qián】并不能直接根据细胞的【de】形态去判断是否老化细胞。

总结：

研究表明,衰老细胞的细胞核、细胞质和细胞膜等均有明显的变化：

①细胞内水分减少,体积变小,新陈代谢速度减慢；

②细胞内酶的活性降低；

③细胞内的色素会积累；

④细胞内呼吸速度减慢,细胞【bāo】核体【tǐ】积增大,核膜内【nèi】折,染色【sè】质【zhì】收缩,颜色加深.线【xiàn】粒体数量减【jiǎn】少,体积增大；

⑤细胞膜通透性功能改变,使物质运输功能降低.

如何防止细胞老化：

1. 不要【yào】等【děng】细胞长得太【tài】满【mǎn】才【cái】传代。细胞太密会【huì】导致细胞状态下降，产生细胞接触【chù】性抑制。

2. 细胞【bāo】不要消化过度。采用医蛋【dàn】白酶消化【huà】细胞，会造成细胞【bāo】表面一定程度的【de】细胞损伤。

3. 最重要的是使用优质的血【xuè】清和培养基：干细胞对培【péi】养基【jī】中的内毒素【sù】非常敏【mǐn】感【gǎn】。除了要留意基础培养【yǎng】基的内毒【dú】素外，也要留意血清的【de】内毒【dú】素。如果血【xuè】清中【zhōng】内毒素≥3EU/ml时【shí】，干细【xì】胞很容易老【lǎo】化或死亡，导致【zhì】细胞“亚健【jiàn】康"状态，导致实验【yàn】受【shòu】到影【yǐng】响。很多使用者【zhě】，在【zài】血清在试用前，就会通过提早审核该批次《检测报告》，以决定是【shì】否入围进行试【shì】用。

4. 在开始养细胞并传【chuán】代时【shí】，也要特别【bié】注意冻存细【xì】胞，以保持细胞有【yǒu】种子【zǐ】库存在【zài】，可以【yǐ】有效避免细胞损伤。