很多试剂检查都涉及到规范【fàn】曲线的【de】疑【yí】问，ELISA试剂盒规范曲【qǔ】线【xiàn】做【zuò】的好与【yǔ】坏会直接影【yǐng】响到试验的成果，乃至关系到【dào】试验的成败，那么究竟怎么【me】绘制或【huò】规【guī】范曲线呢？

一、做规范曲线样品检查时有几个疑问需要注意

1、样品的【de】浓度等目标【biāo】是【shì】依据规范曲线计算【suàn】出来的，所以首先要把做规范【fàn】曲线看作【zuò】是【shì】比做正式试验还【hái】要主要的一【yī】件事，不然后边的试验成【chéng】果【guǒ】无【wú】从谈起。

2、设【shè】置规【guī】范【fàn】曲【qǔ】线【xiàn】样品的规范浓度规模要有一个对比大的【de】跨【kuà】度，而且【qiě】要能包【bāo】括你所要检【jiǎn】查试【shì】验样品的浓度，即样【yàng】品【pǐn】的浓【nóng】度【dù】要在规【guī】范曲线浓度规模以内，人【rén】ELISA试【shì】剂盒包括上限和下限【xiàn】。而对于呈S型的规范曲线【xiàn】，尽量要使试验样品的浓度在中心斜度陡段，即曲线简直成直线【xiàn】的规模内【nèi】。

3、选用【yòng】倍比稀【xī】释【shì】法规范曲线中的规范样品浓度，这么就能够【gòu】确保规范样品【pǐn】的浓度不会出【chū】现较大【dà】的违背。

4、检【jiǎn】查规范样品时，应按浓度【dù】递加【jiā】顺【shùn】序进行，以削减【jiǎn】高浓度【dù】对低浓度的影响【xiǎng】。

5、规范曲线的样品数通常为7个点，但少要确保有5个点。

6、做【zuò】出的规范【fàn】曲线相【xiàng】数【shù】因试验要求不【bú】一样而有所变化，但通常来说，相数R少要【yào】大于0.98，对于有些试验【yàn】，少要0.99乃【nǎi】至是0.999.

二、ELISA试剂盒挑选啥方程去拟合

在S曲线的低浓度部分能【néng】够【gòu】用乘幂【mì】方【fāng】程的拟合，中低浓度部分能够用直线方程【chéng】，中心部分可用【yòng】对数方程，而【ér】中后【hòu】段【duàn】可用四【sì】参【cān】数【shù】。免疫检查时标准点（能够是倍【bèi】比稀释的，也【yě】能够不是）浓【nóng】度假设和相【xiàng】应的吸光度【dù】（OD）值【zhí】假设能够出【chū】现直线【xiàn】当【dāng】然是抱负的了【le】，这时【shí】能够经过EXELL等利便的取得【dé】拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。 

对于标准曲【qǔ】线的拟【nǐ】合办法，直线、二【èr】次【cì】曲【qǔ】线【xiàn】、三次曲线、指【zhǐ】数、对数等【děng】虽都【dōu】可用于ELISA及【jí】其它生物学反响中的【de】曲线【xiàn】拟合，但都只合用于曲【qǔ】线【xiàn】的【de】一部【bù】分【fèn】，有的合用【yòng】于前半段，有【yǒu】的合用于后半【bàn】段，有的合用【yòng】于【yú】中心一【yī】段，而Logistic曲线则对【duì】曲线的悉数都有较【jiào】好的合用性。在一个长的区间【jiān】内，Logistic应当都能拟【nǐ】合得较为抱负。假【jiǎ】设用来定量，S形曲【qǔ】线的中心段（较陡处【chù】）是对比好的，而两真【zhēn】个平整部分计算误差会大，有时乃【nǎi】至会【huì】很大。用于免【miǎn】疫检查的所谓“标准曲线"真【zhēn】实【shí】称为【wéi】拟合曲【qǔ】线对比【bǐ】适【shì】宜。现在国际【jì】上盛行的免疫检查拟合办法【fǎ】是“四参数【shù】逻辑拟合"，用这种拟合办法通常能够对比的反映【yìng】浓度和吸光【guāng】度【dù】的曲线，从而进【jìn】一步对比的取【qǔ】得样品中【zhōng】待测物质的浓【nóng】度值。但咱们做免【miǎn】疫检查很少有时【shí】候能够有这么抱负的情况，标品【pǐn】浓度和相应OD值通常是"S"型【xíng】的曲线【xiàn】，这时就不能【néng】用直线拟【nǐ】合【hé】的办【bàn】法了【le】，而对拟合办法进行挑选即是必要的了。

枢纽在于你【nǐ】的标准曲线做到了【le】S形的哪一【yī】部分【fèn】，你想检查的样品浓度【dù】在曲线的哪一部分。当然，假设用于定量，仍是在中心一段较【jiào】好。但建【jiàn】模型【xíng】是一回事【shì】，而用它来定量是另【lìng】一回事【shì】。这些办法当【dāng】然没有一【yī】种【zhǒng】办法能够通用【yòng】，但也都【dōu】能够用【yòng】。但【dàn】并不是说它即是【shì】的。事实上不仅是ELISA，其它良【liáng】多生物【wù】学反响都是【shì】S形曲线，也【yě】都【dōu】能够用【yòng】Logistic曲线拟合。

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