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欢迎体验ELISA试剂盒新版,三月好发展
更【gèng】新时间【jiān】:2024-9-21   点击次数【shù】:922次

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目前,分子生物学正在【zài】并终肯【kěn】定会让【ràng】我们对整个生命科学【xué】有【yǒu】一个全面而*的【de】认识,其对免疫测定【dìng】技术发展的影响也是直接而【ér】又有效的,它使我们对以【yǐ】前一些【xiē】难以【yǐ】检测的生物活性物质【zhì】的【de】测定变【biàn】得轻而易举,并且大大【dà】提高了检【jiǎn】测【cè】的灵敏度和特异性。

较早用于免疫测【cè】定的基因工程【chéng】抗【kàng】原是HBcAg和HBsAg,这两【liǎng】种【zhǒng】基因【yīn】工程抗原的出现【xiàn】,较好地解决【jué】了抗HBc和HBe的【de】测【cè】定问题。因【yīn】为要从病毒本身去大量【liàng】获取这两种纯抗原较为困难,并且这【zhè】一点【diǎn】对于难培养的病原微生物来【lái】说,如【rú】HIV、HCV和梅毒螺旋体等都【dōu】有些共【gòng】性。

 一、ELISA 

  HCV目前尚【shàng】不【bú】能体外培养,只能用基因工程【chéng】或化学合成方【fāng】法获取HCV结构和非结构【gòu】区的各种抗原片断,已知HCV基因组有【yǒu】7个功能区组【zǔ】成:核心【xīn】、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5(有分为【wéi】NS5a和NS5b)区,合成抗原的优【yōu】点【diǎn】是易于纯化,特异性好【hǎo】,抗【kàng】原抗体反应强。

二、代抗HCV-ELISA

由美国ortho公司克隆C1003抗原几个片断【duàn】与【yǔ】人超氧化【huà】物歧化酶(SOD)结合。用【yòng】酵母从【cóng】病毒基因组非结合【hé】区【qū】得到【dào】表【biǎo】达【dá】,表达为融合蛋白,亦作为包被固相载【zǎi】体。

抗原【yuán】组合【hé】:NS4 区二【èr】个基因片断为NS 9-21-1和C1003

特【tè】性:IgG抗【kàng】C100在发病后数月后,才检出,故不宜作【zuò】早期诊断。

约由【yóu】20%的病人不出现抗体【tǐ】。IgM抗-C100急性【xìng】期【qī】检出率只有64%。

C100的抗【kàng】原【yuán】性较弱,在HCV复制中,不能【néng】充分暴露宿【xiǔ】主的免【miǎn】疫系统。

特异性和灵敏性较差。

三、第二代HCV-ELISA试剂盒

 用基因重组的HCV结构【gòu】蛋白与非结构蛋白抗【kàng】原包【bāo】被【bèi】固相载体。

抗原组合:核心区(C区【qū】)多【duō】肽【tài】C22  NS区多肽C33  C1003和NS 9-21-1

增加C22区和C33区后,抗【kàng】体出现早,有助早【zǎo】期诊断,提高【gāo】阳性率【lǜ】。有利早期【qī】诊【zhěn】断。

C22是早期易出现病毒血症

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四、第四代HCV-ELISA 试剂盒

美国新近推【tuī】出【chū】一种包括HCV基因组7个功【gōng】能【néng】区所有免疫决定基的【de】单一【yī】融【róng】合蛋白,称为多【duō】决定基融【róng】合抗【kàng】原,采【cǎi】用【yòng】表面活性剂处理分界病毒表【biǎo】面复合物,释放HCV核心抗原      (core)并用ELISA法,灵敏度【dù】可达500拷贝/ml,已【yǐ】接近核酸扩增检测【cè】水平【píng】。

 抗原组合:以Core和【hé】NS3作为主【zhǔ】要检【jiǎn】测片断(比例十分重【chóng】要)加合成多肽NS4

 特点:

① 直接测Core抗原;

②不易发生变异;

③ 抗IgM 和IgG检出率可达100%;

④ 特异性达99。8%灵敏度为100%。

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